[发明专利]从矛头蝮蛇蛇毒提取的血凝酶及其制备方法和用途在审
| 申请号： | 201611131105.6 | 申请日： | 2016-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN108611341A | 公开（公告）日： | 2018-10-02 |
| 发明（设计）人： | 崔亮亮;石皎;李秀琳;李秀娜;丁忠福;葛琳;孙东;薛百忠;王宏英;薛雁 | 申请（专利权）人： | 辽宁远大诺康生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64;A61K38/48;A61P7/04 |
| 代理公司： | 北京泛华伟业知识产权代理有限公司 11280 | 代理人： | 李渤;郭广迅 |
| 地址： | 110171 辽宁省*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种从矛头蝮蛇蛇毒(Bothrops atrox)中提取的血凝酶，本发明还提供了所述血凝酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：将矛头蝮蛇蛇毒预处理后，依次经过二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶A‑25离子交换层析；苯甲脒琼脂糖凝胶4FF(HS)亲和层析；以及交联葡聚糖凝胶G‑75凝胶过滤层析；得到矛头蝮蛇蛇毒血凝酶。本发明还提供了一种矛头蝮蛇蛇毒血凝酶在制备用于治疗出血病症的药物中的应用。与现有技术相比，本发明的制备工艺步骤少，周期短，减少过程环境暴露风险；产品收率高，工艺去除杂质能力强，能够获得收率35％以上、纯度98％以上的矛头蝮蛇血凝酶；工艺稳定性高，产品质量一致性好，利于临床用药安全。 | ||
| 搜索关键词： | 矛头蝮蛇 血凝酶 蛇毒 制备 交联葡聚糖凝胶 蛇毒血凝酶 收率 苯甲脒琼脂糖凝胶 预处理 离子交换层析 临床用药安全 凝胶过滤层析 制备工艺步骤 工艺稳定性 出血病症 二乙氨基 过程环境 亲和层析 一致性好 杂质能力 乙基 去除 暴露 治疗 应用 | ||
【主权项】：
1.一种血凝酶，所述血凝酶来源于矛头蝮蛇蛇毒，具有以下特征：1)血凝酶分子量为31731Da，去糖后分子量为25575Da，N‑糖含量为19.4％，3个N‑糖基化位点分别为N98、N146与N225；2)等电点为5‑6；3)血凝酶N端序列为：VIGGDECDINEHPFL；4)血凝酶包含6对二硫键，无自由巯基；5)血凝酶蛋白序列含232个氨基酸；优选地，所述血凝酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示：VIGGDECDINEHPFLAFMYYSPQYFCGMTLINQEWVLTAAHCDKTYMRIYLGIHTRSVANDDEVIRYPKEKFICPNKKKNVITDKDIMLIRLNRPVKNSTHIAPISLPSNPPSVGSVCRIMGWGAITTSEDTYPDVPHCANINLFNNTVCREAYNGLPAKTLCAGVLQGGIDTCGGDSGGPLICNGQFQGILSWGSDPCAEPRKPAFYTKVFDYLPWIQSIIAGNKTATCPP。
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