[发明专利]一种核酸扩增技术及其在蚊媒病毒检测中的应用

摘要

本发明公开了一种核酸扩增技术及其在蚊媒病毒检测中的应用。本发明提供了一种检测待测样本中是否含有n种靶标RNA序列的方法，依次包括如下步骤：(1)提取待测样本的总RNA；(2)进行逆转录重组酶聚合酶扩增；(3)进行重组酶聚合酶扩增；n为自然数。本发明提供了一种引物探针组合，由序列表的序列1至18所示的引物、探针组成。本发明将微流控芯片、重组酶聚合酶扩增和核酸序列依赖性扩增结合起来，可以有效的解决微流控芯片检测限降低的问题。进一步，本发明提供了一种用于检测蚊媒病毒的试剂盒。本发明提供的试剂盒，可以一次性同时完成对六种蚊媒病毒的检测，具有灵敏度高、特异性好、快速便捷等优点，具有广泛的应用价值。

主权项

1.试剂盒，包括特异芯片和引物对组合；所述特异芯片，是将引物探针组Ⅰ、引物探针组Ⅱ、引物探针组Ⅲ、引物探针组Ⅳ、引物探针组Ⅴ和引物探针组Ⅵ分别包埋于微流控芯片的不同反应腔中得到的；所述特异芯片的功能为如下(h1)或(h2)：(h1)用于鉴定寨卡病毒、基孔肯雅病毒、登革热病毒Ⅰ型、登革热病毒Ⅱ型、登革热病毒Ⅲ型或登革热病毒Ⅳ型；(h2)用于检测待测样本中是否含有寨卡病毒和/或基孔肯雅病毒和/或登革热病毒Ⅰ型和/或登革热病毒Ⅱ型和/或登革热病毒Ⅲ型和/或登革热病毒Ⅳ型；所述引物探针组Ⅰ由引物ZIKV‑F、引物ZIKV‑R和探针ZIKV‑P组成；所述引物ZIKV‑F为序列表的序列1所示的单链DNA分子；所述引物ZIKV‑R为序列表的序列2所示的单链DNA分子；所述探针ZIKV‑P的核苷酸序列为如序列表的序列13所示的单链DNA分子；所述引物探针组Ⅱ由引物CHIKV‑F、引物CHIKV‑R和探针CHIKV‑P组成；所述引物CHIKV‑F为序列表的序列3所示的单链DNA分子；所述引物CHIKV‑R为序列表的序列4所示的单链DNA分子；所述探针CHIKV‑P的核苷酸序列为如序列表的序列14所示的单链DNA分子；所述引物探针组Ⅲ由引物DENV1‑F、引物DENV1‑R和探针DENV1‑P组成；所述引物DENV1‑F为序列表的序列5所示的单链DNA分子；所述引物DENV1‑R为序列表的序列6所示的单链DNA分子；所述探针DENV1‑P的核苷酸序列为如序列表的序列15所示的单链DNA分子；所述引物探针组Ⅳ由引物DENV2‑F、引物DENV2‑R和探针DENV2‑P组成；所述引物DENV2‑F为序列表的序列7所示的单链DNA分子；所述引物DENV2‑R为序列表的序列8所示的单链DNA分子；所述探针DENV2‑P的核苷酸序列为如序列表的序列16所示的单链DNA分子；所述引物探针组Ⅴ由引物DENV3‑F、引物DENV3‑R和探针DENV3‑P组成；所述引物DENV3‑F为序列表的序列9所示的单链DNA分子；所述引物DENV3‑R为序列表的序列10所示的单链DNA分子；所述探针DENV3‑P的核苷酸序列为如序列表的序列17所示的单链DNA分子；所述引物探针组Ⅵ由引物DENV4‑F、引物DENV4‑R和探针DENV4‑P组成；所述引物DENV4‑F为序列表的序列11所示的单链DNA分子；所述引物DENV4‑R为序列表的序列12所示的单链DNA分子；所述探针DENV4‑P的核苷酸序列为如序列表的序列18所示的单链DNA分子；所述引物对组合由引物对Ⅰ、引物对Ⅱ、引物对Ⅲ、引物对Ⅳ、引物对Ⅴ和引物对Ⅵ组成；所述引物对Ⅰ由引物探针组Ⅰ中的引物ZIKV‑F和引物ZIKV‑R组成；所述引物对Ⅱ由引物探针组Ⅱ中的引物CHIKV‑F和引物CHIKV‑R组成；所述引物对Ⅲ由引物探针组Ⅲ中的引物DENV1‑F和引物DENV1‑R组成；所述引物对Ⅳ由引物探针组Ⅳ中的引物DENV2‑F和引物DENV2‑R组成；所述引物对Ⅴ由引物探针组Ⅴ中的引物DENV3‑F和引物DENV3‑R组成；所述引物对Ⅵ由引物探针组Ⅵ中的引物DENV4‑F和引物DENV4‑R组成。