[发明专利]一种高特异性的胚系碱基突变PCR检测方法在审
| 申请号： | 201611032168.6 | 申请日： | 2016-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN108103158A | 公开（公告）日： | 2018-06-01 |
| 发明（设计）人： | 张乐橦;宋炎;刘磊;刘军;朱红梅;叶明芝 | 申请（专利权）人： | 天津华大医学检验所有限公司;深圳华大基因股份有限公司;广州华大基因医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 孙银行;彭家恩 |
| 地址： | 300000 天津市自贸区（空港经济*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高特异性的胚系碱基突变PCR检测方法，包括：在无3’‑5’外切酶活性且有焦磷酸解活性的DNA聚合酶的作用下，在焦磷酸盐存在的环境下，使用修饰引物进行PCR扩增，修饰引物的3’末端是双脱氧核苷酸，该3’末端与胚系碱基突变位点野生型基因型一致而与突变型基因型不一致，在有胚系碱基突变位点野生型模板存在的情况下，DNA聚合酶依赖模板而焦磷酸解修饰引物的3’末端与模板互补的双脱氧核苷酸，引物正常延伸，使用实时荧光定量PCR对样本进行检测，与内参基因的Ct值比较判断样本有无纯合突变或杂合突变。本发明的方法能够提高特异性和灵敏度，可针对胚系碱基突变，并可定量检测基因频率，解决了ASA‑PCR假阳性导致基因频率定量不准的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 胚系 碱基突变 修饰引物 碱基突变位点 双脱氧核苷酸 基因频率 焦磷酸 样本 实时荧光定量PCR 突变型基因型 野生型基因型 外切酶活性 比较判断 纯合突变 定量检测 焦磷酸盐 内参基因 杂合突变 不一致 假阳性 灵敏度 野生型 引物 检测 延伸 | ||
【主权项】：
1.一种高特异性的胚系碱基突变PCR检测方法，其特征在于，所述方法包括：在无3’-5’外切酶活性且有焦磷酸解活性的DNA聚合酶的作用下，在焦磷酸盐存在的环境下，使用修饰引物进行PCR扩增，所述修饰引物的3’末端是双脱氧核苷酸，该3’末端与胚系碱基突变位点野生型基因型一致而与突变型基因型不一致，在有胚系碱基突变位点野生型模板存在的情况下，所述DNA聚合酶依赖模板而焦磷酸解所述修饰引物的3’末端与模板互补的双脱氧核苷酸，引物正常延伸，野生型模板被扩增，使用实时荧光定量PCR对样本进行检测，与内参基因的Ct值比较判断样本有无纯合突变或杂合突变。
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