[发明专利]杂交黄颡鱼的CH4酶切鉴定方法有效
| 申请号： | 201610864434.5 | 申请日： | 2016-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN106282379B | 公开（公告）日： | 2019-10-01 |
| 发明（设计）人： | 文秦超;荆慧芳;黎树;张修月;宋昭彬 | 申请（专利权）人： | 四川大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 成都环泰知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 51242 | 代理人： | 邹翠;李斌 |
| 地址： | 610065 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种杂交黄颡鱼的CH4酶切鉴定方法，利用PCR扩增后的CH4基因片段在黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼之间具有种间序列差异，以限制性核酸内切酶HindⅢ进行酶切，酶切位点为A↓AGCTT，采用RFLP方法分析鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交子代。从分子生物学层面上将形态上不易区分的杂种和纯种进行区分，具有实验快捷，操作简便，鉴定直观，无需测序的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 黄颡鱼 瓦氏黄颡鱼 酶切鉴定 限制性核酸内切酶 杂交 分子生物学 方法分析 基因片段 酶切位点 序列差异 杂交子代 测序 酶切 种间 鉴别 直观 | ||
【主权项】：
1.杂交黄颡鱼的CH4酶切鉴定方法，其特征在于，利用PCR扩增后的CH4基因片段在黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼之间具有种间序列差异，以限制性核酸内切酶HindⅢ进行酶切，酶切位点为A↓AGCTT，采用RFLP方法分析鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交子代；具体包括以下步骤：A、取待测鱼的组织样本，提取基因组DNA；B、以提取到的基因组DNA为模板，在专用引物的引导下进行PCR扩增；C、对扩增出的目的基因片段采用限制性核酸内切酶HindⅢ进行酶切，酶切位点为A↓AGCTT；D、琼脂糖凝胶电泳检测PCR‑RFLP产物，经电泳检测，在同一个泳道上只有一条带，为瓦氏黄颡鱼；在同一泳道上有两条带，为黄颡鱼；在同一泳道上有三条带，为杂交种；所述B步骤中的专用引物为CH4基因片段专用引物，引物对为：正向引物 5’‑TCCCCAAGGTTTACTTGCTCGCTCC‑3’；反向引物 5’‑CGATGGATCTGGATATGTGGCGCAC‑3’。
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