[发明专利]杂交黄颡鱼的CH4酶切鉴定方法

说明书

本发明提供了一种杂交黄颡鱼的CH₄酶切鉴定方法，利用PCR扩增后的CH₄基因片段在黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼之间具有种间序列差异，以限制性核酸内切酶HindⅢ进行酶切，酶切位点为A↓AGCTT，采用RFLP方法分析鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交子代。从分子生物学层面上将形态上不易区分的杂种和纯种进行区分，具有实验快捷，操作简便，鉴定直观，无需测序的优点。

技术领域

本发明涉及鱼类杂种的鉴定方法，具体涉及水产养殖黄颡鱼杂种的CH₄分子标记鉴定方法。

背景技术

黄颡鱼属鱼类属于杂食性底层鱼类，以肉食为主，是鱼类进化中最发达的真骨鱼类之一。黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)和瓦氏黄颡鱼 (Pelteobaggrus vachelli)均属于鲇形目、鲿科、黄颡鱼属，两者味道鲜美、营养价值高，是重要的养殖鱼类。黄颡鱼分布于我国长江、黄河、珠江及黑龙江、辽宁等流域，喜栖息于开敞水体，营底栖生活，湾沱、河底砾石河段都适合它们栖息，1～2龄鱼生长较快，以后生长缓慢，其个体小、但对环境的适应能力强。瓦氏黄颡鱼分布于长江、珠江、钱塘江、淮河、黄河及其支流，长期与大型河流相通的大型湖泊中也有分布，为底栖性鱼类，栖息于江河缓流或湖泊静水环境中，1～3龄鱼生长快，之后相对缓慢，其个体在黄颡鱼属中最大，且肉质细嫩、刺少，具有重要的经济价值。

为了满足社会生产的需要，获得兼有以上两种鱼优良性状的苗种，王卫民等(黄颡鱼♀与瓦氏黄颡鱼♂的杂交研究[J].淡水渔业，2002.32(3):3-5) 开展了黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼的杂交育种试验，对杂交和自交的卵受精率、孵化率和出苗率进行了对比分析。之后赵文学等(黄颡鱼属物种的RAPD分子鉴定及杂种遗传分析[J].2006.30(1):101-105)进行了黄颡鱼属及其杂交种的种质鉴定，然而，该鉴定工作所采用的RAPD标记，受方法本身的限制，检测效率低且重复性不高，严重影响了这一方法的推广使用。鉴于此，有必要丰富黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交子代的分子标记及鉴定技术，为黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂种的养殖和育种实践提供参考。

发明内容

本发明为了鉴定黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种(本发明涉及的杂交种均为♀黄颡鱼X瓦氏黄颡鱼♂所产生的杂交种)，提供了一种杂交黄颡鱼的CH₄酶切鉴定方法，从分子生物学层面上将形态上不易区分的杂种和纯种进行区分。

本发明以黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交子代为研究对象，在黄颡鱼属鱼类中筛选了CH₄基因片段作为分子标记，应用CH₄基因片段的RFLP分析，成功鉴定了黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交子代。

为实现上述发明目的，本发明采用如下的技术方案：

杂交黄颡鱼的CH₄酶切鉴定方法，利用PCR扩增后的CH₄基因片段在黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼之间具有种间序列差异，以限制性核酸内切酶HindⅢ进行酶切，酶切位点为A↓AGCTT，采用RFLP方法分析鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交子代。

CH₄基因片段是免疫球蛋白重链编码基因外显子的一部分，在近缘种间高度保守。本发明发现CH₄基因片段在黄颡鱼与瓦氏黄颡鱼之间存在种间序列差异，将CH₄基因片段的RFLP分析用于黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交子代的鉴定，具有实验快捷，操作简便，鉴定直观，无需测序的优点。

本发明所述杂交黄颡鱼的CH₄酶切鉴定方法，具体包括以下步骤：

A、取待测鱼的组织样本，提取基因组DNA；

B、以提取到的基因组DNA为模板，在专用引物的引导下进行PCR扩增；

C、对扩增出的目的基因片段采用限制性核酸内切酶HindⅢ进行酶切，酶切位点为A↓AGCTT；