[发明专利]一种快速区分4种禽呼吸道病原的多重荧光免疫分析的引物、试剂盒及方法

摘要

本发明公开了一种快速区分4种禽呼吸道病原的多重荧光免疫分析的引物、试剂盒及方法。本发明操作简单，通过PCR获得目标扩增片段，然后将扩增产物、荧光编码微球和链霉亲和素‑藻红蛋白进行杂交，然后通过检测仪读取MFI值，分辩不同类型的病毒。本发明方法，能够同时对鸡新城疫病毒、禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒进行准确检测，而且特异性强，灵敏度高，重复性好。与传统检测方法相比，本发明方法实现了对同一样本中的多种不同目的分子同时进行检测，样本用量少，操作简单、快速，可大大降低检测成本。本发明的灵活性好，可以根据需要在此基础上加减检测病原的种类。

主权项

1.一种快速区分4种禽呼吸道病原的多重荧光免疫分析的引物，所述4种禽呼吸道病原为鸡新城疫病毒、禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒，其特征在于，所述引物核苷酸序列如下所示：引物N1：5’-CTCATCTCAGACAGGGTCAATC-3’(SEQ ID NO:1)，引物N2：5’-ATGGAGTCACCAAGGGG-3’(SEQ ID NO:2)；引物A1：5’-ATGAGTCTTCTACCCGAGG-3’(SEQ ID NO:3)，引物A2：5’-TCAGAGGTGACAGGATTG-3’(SEQ ID NO:4)；引物B1：5’-AATCACGCTCAAGTTCAAGGC-3’(SEQ ID NO:5)，引物B2：5’-GCATTGTTCCTCTCCTCATC-3’(SEQ ID NO:6)；引物L1：5’-GCAGCGAAAAGAAGGC-3’(SEQ ID NO:7)，引物L2：5’-TCATCGTGCTCGGTGTCC-3’(SEQ ID NO:8)；所述引物N1和N2、A1和A2、B1和B2、L1和L2这4组引物对中连接的tag序列选自SEQ IDNO:9～12所示的tag序列，且该4组引物对中连接的tag序列互不相同。