[发明专利]一种固态发酵制备纳豆激酶的方法

摘要

本发明属于微生物发酵工程技术领域，涉及一种固态发酵制备纳豆激酶的方法，先分别配制斜面培养基、种子液培养基和发酵培养基，再将纳豆芽孢杆菌接种到斜面培养基上培养得到活化后的纳豆芽孢杆菌后挑取1～2环到种子液培养基中振荡培养作为发酵种子液，然后将发酵培养基灭菌后自然冷，将发酵种子液喷洒于发酵培养基中，并加入水搅拌均匀候在烧杯中铺成薄层，用纱布封口后依次发酵、后熟24h后加入生理盐水，浸提、离心后获得富含纳豆激酶的上清液；其制备工艺简单，操作方便，原料易得，成本低，制备的纳豆激酶活性高，经济效益明显。

主权项

1.一种固态发酵制备纳豆激酶的方法，其特征在于制备纳豆激酶的具体过程为：/n(1)培养基的配制：将琼脂15g/L、蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L和氯化钠5g/L混合均匀后在121℃灭菌20min得到pH值为7.1～7.5的斜面培养基；将蛋白胨10g/L、牛肉膏5g/L、氯化钠3g/L、葡萄糖10g/L和酵母膏5g/L混合均匀后在121℃下灭菌20min得到种子液培养基；将花生粕、麸子、豆粕、燕麦、大豆分别用清水洗净并加总重量3倍的水浸泡15h后按6:1:1:1:1的重量比混合，并加入花生粕、麸子、豆粕、燕麦和大豆总重量1.5的％蔗糖、0.21％的硫酸镁、0.27％的氯化钙混合组成的营养盐，混合均匀在121℃下灭菌20min得到发酵培养基；/n(2)纳豆芽孢杆菌种子液的制备：在无菌环境下，将纳豆芽孢杆菌用接种环挑出1～2环接种到斜面培养基上，在37℃培养箱中培养24h得到活化后的纳豆芽孢杆菌，将活化后的纳豆芽孢杆菌在无菌条件下挑取1～2环到种子液培养基中，在37℃、160r/min条件下振荡培养18h作为发酵种子液，备用；/n(3)将发酵培养基经121℃在0.22MPa压力下蒸汽灭菌20min后自然冷却至55℃以下，在无菌条件下，将5mL发酵种子液喷洒于30g发酵培养基中，并加入发酵培养基重量40％的水搅拌均匀，于200mL的烧杯中铺成2-3cm的薄层，用纱布封口后在37℃条件下发酵24h、4℃后熟24h后，加入总重量5倍的生理盐水，在4℃浸提2h后10000r/min离心10min，获得富含纳豆激酶的上清液；制备的纳豆激酶活力能达到3162 U/mL，可溶性氮含量能达到5.6mg/mL,羟自由基清除率能达到74％，铁还原力OD值能达到0.906。/n