[发明专利]三步法快速检测石斑鱼β诺达病毒的试剂盒及其操作方法

摘要

本发明公开了三步法快速检测石斑鱼β诺达病毒的试剂盒及其操作方法。本发明试剂盒包括：PBS预处理液、RNA快速提取液和检测液。本发明采用了快速提取RNA的方法，加上预混检测液、试剂一次性使用等设计，通过简化的三步操作即可完成病毒检测，检测过程不易被污染，可操作性强。本发明设计的试剂盒检测结果可视化，适用于无专业知识的基层工作人员，可用于防控石斑鱼诺达病毒的流行，应用前景广泛，适合商业化生产。

主权项

1.一种三步法快速检测石斑鱼β诺达病毒的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括：PBS预处理液、RNA快速提取液和检测液；所述的PBS预处理液是pH7.2±0.2的PBS溶液；所述的RNA快速提取液是Epicentre Biotechnologies公司QuickExtract^TM RNA Extraction Solution型号的试剂；所述的检测液为环介导等温扩增反应液，其每20μl体系中含有：8‑10U/μl Bst 2.0聚合酶1μl，1‑2U/μl AMV逆转录酶1μl，15‑20U/μl RNase抑制剂1μl，1.0‑2.0mM dNTPs 3.5μl，10×Amplification Buffer 2.5μl，6‑8mM MgSO₄ 1.5μl，1M甜菜碱5μl，10×SYTO‑9染料0.5μl，0.2μM上游外引物F₃ 1μl，0.2μM下游外引物B₃ 1μl，1.6μM上游内引物FIP 1μl，1.6μM下游内引物BIP 1μl；其中，10×Amplification Buffer含有200mM Tris‑HCl、100mM(NH₄)₂SO₄、500mM KCl、20mM MgSO₄和1％Tween 20，PH 8.8；上游外引物F₃为：5’‑GGTGCAGTCGTTGCCAAAT‑3’，下游外引物B₃为：5’‑CGACATAGCACCGACACG‑3’，上游内引物FIP为：5’‑TCCTTTCCCGACGAGGTCCAGGTGGGAAAGCAGTACAGTCC‑3’，下游内引物BIP为：5’‑AGCGTCTCACGTCACCTGGTACCACATCGGTGTTGTTGC‑3’。