[发明专利]一种筛查DNA甲基化修饰相关基因的方法

摘要

本发明提供了一种筛查DNA甲基化修饰相关基因的方法，属于DNA检测技术领域。本发明利用单基因缺失型突变体生物材料，采用化学发光酶联免疫法检测基因组DNA链中的碱基甲基化水平，通过比较基因缺失型突变体与其同源正常对照组细胞中基因组DNA的甲基化水平，分析突变体中缺失基因与DNA碱基甲基化修饰的关系，筛选出与DNA甲基化修饰相关的基因。该方法既具有对DNA中甲基化碱基的检测特异性，又具有极高的检测灵敏度。本发明操作步骤简便，成本较低，稳定性强，无需大型昂贵设备，可同时检测多个样本。

主权项

1.一种筛查植物或微生物DNA甲基化修饰相关基因的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取单基因缺失的突变体生物材料及其相应的对照组材料；设药物处理组和对照组，药物处理组用过氧亚硝酸盐处理，对照组不加过氧亚硝酸盐；取药物处理组和对照组材料的组织或细胞，提取基因组DNA；(2)取步骤(1)得到的纯度和质量合格的DNA样品，于4℃超声波断裂为长度450‑1500nt的片段，100℃保温5‑8分钟后迅速制冷，加入等体积预冷2mol/L乙酸铵溶液，混匀；(3)取DNA标准品和步骤(2)处理的DNA样品各1‑10μg，分别加入到装有硝酸纤维素膜的Bio‑Dot的狭缝或小孔底部，各点位加载等质量的DNA样品，接通低真空泵抽真空30‑60分钟；(4)取甲基胞嘧啶或甲基鸟嘌呤的特异性单克隆抗体，采用化学发光酶联免疫法检测DNA样品中的碱基甲基化水平；(5)比较基因缺失型突变体材料与对照组材料中基因组DNA的甲基化水平，分析突变体材料与对照组材料甲基化水平的差异，筛选与对照材料基因组DNA甲基化水平明显不同的突变体作为甲基化修饰功能缺陷的突变体，突变体所缺失的基因为甲基化修饰相关基因；所述的生物材料是植物或微生物。