[发明专利]基于自动设计的引物的高效荧光等位基因特异性聚合酶链式反应方法及检测基因分型方法有效
| 申请号： | 201610163865.9 | 申请日： | 2016-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN105755125B | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 秦鹏飞 | 申请（专利权）人： | 杭州精皮士生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 杭州之江专利事务所(普通合伙) 33216 | 代理人： | 张慧英 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市滨江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种等位基因特异性聚合酶链式反应的自动引物设计方法，还提供了采用上述设计的引物进行高效荧光等位基因特异性聚合酶链式扩展反应的方法及检测基因分型的方法；对于任意SNP位点，取得其上下游40～60bp的序列设计四个内引物，任意一个内引物的设计从3＇末端开始，任意一个内引物的3＇末端都在单核苷酸多样性位点上有特异性匹配，所述的单核苷酸多样性位点的匹配位点在引物3＇末端的－1～－3位；得到内引物后，在每个内引物5’端加一个不与模板特异性匹配的短片段，内引物与短片段共同组成外引物。通过本发明可以在相同的反应条件下实现高的基因分型分析的检测特异性。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 自动 设计 引物 高效 荧光 等位基因 特异性 聚合 链式反应 方法 检测 基因 | ||
【主权项】：
1.一种等位基因特异性聚合酶链式反应的自动引物设计方法，其特征在于，包括步骤如下：(1)对于任意SNP位点，取得其上下游40～60bp的序列设计四个内引物，任意一个内引物的设计从3＇末端开始，任意一个内引物的3＇末端都在单核苷酸多样性位点上有特异性匹配，所述单核苷酸多样性位点的匹配位点在任意一个内引物3＇末端的－1～－3位，四个内引物的退火温度在44－60℃之间；(2)得到内引物后，在每个内引物5’端加一个不与模板特异性匹配的短片段，所述短片段的长度在2～10bp，内引物与短片段共同组成外引物，所述的四个外引物的退火温度在55～75℃之间。
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