[发明专利]用于测定大豆疫霉菌无毒基因Avr3a对鉴别寄主L83-570致病性的分子方法

摘要

本发明涉及用于测定大豆疫霉菌无毒基因Avr3a对鉴别寄主L83‑570致病性的分子方法，提取待检测大豆疫霉菌的基因组DNA；PCR扩增出包括完整无毒基因Avr3a的DNA片段；用限制性内切酶BmgBI酶切扩增出的DNA片段；对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，琼脂糖凝胶电泳图在250bp‑500bp范围内有2条DNA条带，则对应的待检测大豆疫霉菌菌株对鉴别寄主L83‑570表现为不致病，酶切后在750bp以下有1条DNA条带，则对应的待检测大豆疫霉菌菌株对鉴别寄主L83‑570表现为致病。该方法测定周期短、无中间类型，可同时测定多株大豆疫霉菌无毒基因Avr3a对鉴别寄主L83‑570的致病性。

主权项

1.用于测定大豆疫霉菌无毒基因Avr3a对鉴别寄主L83‑570致病性的分子方法，其特征在于：采用CTAB法提取待检测大豆疫霉菌的基因组DNA；然后设计一对特异性引物AVR3A1F/AVR3A1R，所述的一对特异性引物AVR3A1F/AVR3A1R的碱基序列分别为：AVR3A1F：5ˊ‑ATCGAAGCCATATATCTACAGG‑3ˊ；AVR3A1R：5ˊ‑CCTACTGTATGCAAAGTGATCG‑3ˊ；以提取的基因组DNA为模版进行PCR扩增，所述的一对特异性引物AVR3A1F/AVR3A1R分别结合在无毒基因Avr3a的上游和下游，从而使PCR扩增出的DNA片段包括完整的无毒基因Avr3a；用限制性内切酶BmgBI酶切扩增出的DNA片段，得到酶切产物；对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，得到酶切产物的琼脂糖凝胶电泳图；观察酶切产物琼脂糖凝胶电泳图，如果在250bp‑500bp范围内有2条DNA条带，则对应的待检测大豆疫霉菌菌株对鉴别寄主L83‑570表现为不致病；如果酶切后在750bp以下有1条DNA条带，则对应的待检测大豆疫霉菌菌株对鉴别寄主L83‑570表现为致病。