[发明专利]荧光定量PCR对鲐鱼中腐败微生物的检测法及所用引物有效
| 申请号： | 201610070384.3 | 申请日： | 2016-01-31 |
| 公开（公告）号： | CN105525019B | 公开（公告）日： | 2019-04-09 |
| 发明（设计）人： | 冯俊丽;孟璐;戴志远;金仁耀;沈清 | 申请（专利权）人： | 浙江工商大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/63;C12R1/01 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310018 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种荧光定量PCR技术对鲐鱼中腐败微生物的检测法及所用的特异性引物，本发明的检测法包括以下步骤：1)、作为待测样品的鲐鱼进行DNA的提取；2)、设计荧光定量PCR中的特异性引物，设置荧光定量PCR体系；3)、以基因组DNA为扩增模板，用上述特异性引物，进行荧光定量PCR扩增；从而检测鲐鱼中的腐败微生物。检测基因无特异性扩增曲线产生、Ct值≥35者，判定结果为阴性，即样品中未检出该基因所对应的微生物；Ct值小于35者，可判定该样品结果为阳性，即样品中能检出该基因所对应的微生物。 | ||
| 搜索关键词： | 荧光 定量 pcr 鲐鱼中 腐败 微生物 检测 所用 引物 | ||
【主权项】：
1.利用特异性引物进行的荧光定量PCR技术对鲐鱼中腐败微生物的非诊断检测法，其特征是包括以下步骤：1)、作为待测样品的鲐鱼进行DNA的提取；2)、利用荧光定量PCR中的特异性引物，设置荧光定量PCR体系；特异性引物由以下四种组成：![]()
3)、以基因组DNA为扩增模板，用上述特异性引物，进行荧光定量PCR扩增；从而检测鲐鱼中的腐败微生物：根据荧光定量PCR反应中的特异性扩增曲线与对应的阈值进行判断；检测基因无特异性扩增曲线产生、Ct值≥35者，判定结果为阴性，即样品中未检出该基因所对应的微生物；Ct值小于35者，可判定该样品结果为阳性，即样品中能检出该基因所对应的微生物；当hdc、tora、tlh、inlA这4种基因的ct均大于27.5，判定该鲐鱼属于新鲜；当任一基因的Ct≤27.5时，判定该鲐鱼已变质。
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