[发明专利]荧光定量PCR对鲐鱼中腐败微生物的检测法及所用引物

权利要求书

1.利用特异性引物进行的荧光定量PCR技术对鲐鱼中腐败微生物的非诊断检测法，其特征是包括以下步骤：

1)、作为待测样品的鲐鱼进行DNA的提取；

2)、利用荧光定量PCR中的特异性引物，设置荧光定量PCR体系；

特异性引物由以下四种组成：

3)、以基因组DNA为扩增模板，用上述特异性引物，进行荧光定量PCR扩增；从而检测鲐鱼中的腐败微生物：

根据荧光定量PCR反应中的特异性扩增曲线与对应的阈值进行判断；

检测基因无特异性扩增曲线产生、C_t值≥35者，判定结果为阴性，即样品中未检出该基因所对应的微生物；C_t值小于35者，可判定该样品结果为阳性，即样品中能检出该基因所对应的微生物；

当hdc、tora、tlh、inlA这4种基因的ct均大于27.5，判定该鲐鱼属于新鲜；

当任一基因的C_t≤27.5时，判定该鲐鱼已变质。

2.根据权利要求1所述的荧光定量PCR技术对鲐鱼中腐败微生物的非诊断检测法，其特征是：

所述荧光定量PCR扩增体系为：20μL总体积中含有SYBER Green Ex Taq(2×)10μL，上下游引物各0.4μL，DNA模板1.0μL，补水至20μL。

3.根据权利要求2所述的荧光定量PCR技术对鲐鱼中腐败微生物的非诊断检测法，其特征是荧光定量PCR反应程序：

95℃预变性30sec；95℃变性5sec，60℃退火并延伸31sec，40个循环，在每个循环的60℃退火并延伸阶段收集荧光信号。

4.根据权利要求1所述的荧光定量PCR技术对鲐鱼中腐败微生物的非诊断检测法，其特征是：

步骤1)中，DNA的提取采用Axygen基因组DNA小量提取试剂盒。