[发明专利]一种DNA高通量测序建库方法

摘要

本发明提供了一种适用于复杂环境中生物DNA的高通量测序建库方法，包括以下步骤：(1)对待测生物的基因组DNA进行片段化处理，获得DNA片段化物料；(2)对所述DNA片段化物料进行琼脂糖凝胶电泳获得电泳胶块，切取所述电泳胶块中文库目的大小的片段至比所述文库目的大小的片段大40‑60bp的片段范围内的凝胶，回收凝胶内的DNA获得第一纯化DNA；(3)对所述第一纯化DNA进行末端修复，3`末端加A，连接接头序列获得连接产物，并对连接产物进行Solexa PCR扩增，获得文库。本发明方法操作简单，能够解决复杂环境中生物DNA(如：海带DNA、贝类DNA、石榴DNA等)建库困难的问题，且能够降低接头使用量，为高通量测序提供一种疑难样品的建库方案。

主权项

1.海带DNA高通量测序建库方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取出海带DNA样品500ng，加入到PCR管中，补H2O至总体积44μl，置于超声波清洗仪中进行DNA破碎至片段大小300‑400bp；其中文库目的片段大小为300bp；2)DNA片段化产物点样于2.0％琼脂糖凝胶上进行电泳，电泳条件110V，120min，切取300‑400bp范围内凝胶，并用QIAGEN公司提供的QIAquick Gel Extraction Kit试剂盒进行回溶，回溶体积55.5μl；3)根据南京诺唯赞公司提供的VAHTS^TMTurbo DNA Library Prep Kit for和VAHTS DNA Adapters set1/set2 for试剂盒对片段化且纯化后的DNA进行末端修复、3`末端加A、连接适用于Illumina测序平台的接头；其中接头需要用H₂O稀释10倍；4)连接产物使用1.8倍样品体积的AMPure XP Beads进行纯化，最后溶剂体积为30μl；5)取出连接产物纯化后的12μl，利用VAHTS^TMTurbo DNA Library Prep Kit for试剂盒提供的高保真Taq酶进行Solexa PCR，添加特定Index；6)Solexa PCR产物点样于2.0％琼脂糖凝胶上进行电泳，电泳条件110V，120min；电泳完毕的凝胶进行染色、成像，观察样品亮度；7)切取400‑450bp范围内凝胶，使用QIAGEN公司提供的MinElute PCR Purification Kit试剂盒对文库进行回收，回溶体积为26μl；文库构建结束。