[发明专利]一种在一管中进行磁珠提取核酸与扩增的实时荧光定量PCR方法

摘要

本发明提供了一种在一管中进行磁珠提取核酸与扩增的实时荧光定量PCR方法，将混合有磁珠的裂解液和待检测样品加入到PCR扩增管中，混匀，静置，进行磁吸后吸出混合液，将得到的磁珠洗涤一次；在上述PCR扩增管中加入配制好的PCR反应液，对目标核酸进行实时荧光定量PCR反应；所述裂解液的组成为：0.2～0.4N氢氧化钠、0.3～0.6M氯化钾、0.01～0.05％N‑月桂酰肌氨酸钠、5mM EDTA、0.3～0.6M Tris‑HCL和1～2％曲通X‑100。本发明方法不需要加热，室温裂解时间5～10分钟左右即可，只需静态洗涤一次，从而减少了实验室污染和磁珠核酸的丢失，避免了分步操作所带来的污染可能性，节省了检测时间。其敏感性以HBV DNA定量为例，可低至5IU/ML，重复性良好。

主权项

1.一种在一管中进行磁珠提取核酸与扩增的实时荧光定量PCR方法，其特征在于，将混合有磁珠的裂解液和待检测样品加入到PCR扩增管中，混匀，静置，进行磁吸后吸出混合液，将得到的磁珠洗涤一次；在上述PCR扩增管中加入配制好的PCR反应液，对目标核酸进行实时荧光定量PCR反应；所述裂解液的组成为：0.2～0.4N氢氧化钠、0.3～0.6M氯化钾、0.01～0.05％N‑月桂酰肌氨酸钠、5mM EDTA、0.3～0.6M Tris‑HCL、3～8mM DTT和1～2％曲通X‑100；所述洗涤使用的洗涤液为0.3～0.6M氯化钾溶液，所述洗涤液的pH值为4～5。