[发明专利]用于扩增核酸样品的等温方法

摘要

本发明提供核酸扩增和检测反应的两阶段方法，其适用于快速病原体检测或疾病诊断。具体说来，本发明提供一种方法，其包括第一阶段慢速扩增反应，接着是多个第二阶段快速扩增反应，对所述第二阶段快速扩增反应进行同时实时监测，且其中快速扩增速率指示目标位点的存在。

主权项

一种两阶段核酸扩增和实时检测方法，所述方法包括：a.提供包含靶核酸模板和至少一种引物的组合物，所述引物与所述靶核酸模板在靠近待扩增的目标区域处退火；b.进行第一核酸扩增反应以扩增所述目标区域，由此形成初级扩增子；c.将(b)分成至少两个二级反应，并且位点特异性二级引物包括在至少一个所述反应中，所述位点特异性二级引物与可存在于所述初级扩增子内并界定所述目标区域内的目标位点的位点特异性引物结合位点互补；d.仅在所述位点特异性引物结合位点与所述位点特异性引物互补时进行第二核酸扩增反应(第二阶段反应)，由此加速所述目标区域的扩增；以及e.实时检测并比较所述至少两个二级反应的扩增速率，其中在具有所述二级引物的反应中提高的相对扩增速率指示存在与所述二级引物互补的所述目标位点。