[发明专利]玉米抗氧化活性肽及其制备方法

摘要

本发明公开了一种由蛋白酶协同酶解玉米黄粉生产新的、高抗氧化活性玉米肽及制备方法。以经挤压膨化和去除淀粉的玉米黄粉为原料，加水配制底物浓度为10%的悬浮液，先接入Alcalase酶酶解75min，再接入Flavourzyme酶酶解50min获得具有抗氧化活性的多肽混合物。采用超滤、离子交换层析、凝胶层析和反相色谱法对该混合物进行分离，最后利用Q‑TOF2测定抗氧化活性肽的氨基酸序列。化学合成后评估玉米肽的体外抗氧化活性，最终获得三个新的、高抗氧化活性的玉米肽，氨基酸序列分别为：CSQAPLA、KSCAPLAS和ADCGWPA。三者对DPPH自由基清除的IC₅₀值分别为0.12 mg/mL、0.13 mg/mL和0.23mg/mL；对超氧阴离子自由基清除的IC₅₀值分别0.39mg/mL、0.41 mg/mL和0.19mg/mL，效果与维生素C和谷胱甘肽相当，可以作为天然抗氧化剂应用于食品及医药中。

主权项

1.一种高抗氧化活性的玉米肽，是以经挤压膨化并去除淀粉的玉米黄粉为原料，采用蛋白酶协同酶解方式，获得具有抗氧化活性的多肽混合物，再通过超滤、离子交换层析、凝胶层析、反相色谱，逐级收集高活性且分子量在600‑1400Da范围内的组分，最后通过质谱测序获得六个玉米肽的氨基酸序列；化学合成后评估玉米肽的体外抗氧化活性，最终获得一种高抗氧化活性玉米肽：CSQAPLA；该玉米肽对DPPH自由基清除的IC50值为0.12mg/mL；对超氧阴离子自由基清除的IC50值为0.39mg/mL;所述反相色谱的分离步骤包括：①半制备型反相色谱柱确定抗氧化肽的活性区域称取20mgSephadexG‑25分离所得活性组分溶于1mL的2%乙腈水溶液中，用0.22μm微孔滤膜过滤，色谱柱的型号为ProntoSILC18，φ10×250mm，10μm，流速为1.5mL/min，流动相A为含0.065%TFA的2%乙腈水溶液，流动相B为含0.05%TFA的80%乙腈水溶液，梯度洗脱60min，采用自动部分收集器收集开始出峰时的玉米肽组分，每管收集3mL，测定每管样品的抗氧化活性，确定活性区域在8、11和13管；②分析型反相色谱柱分离抗氧化活性肽将半制备反相色谱柱分离所得活性组分溶于2%乙腈水溶液中，进一步用分析柱进行分离纯化，分析柱的柱型为XselectCSH，φ4.6×150mm，3.5μm，检测波长为214nm，流速为1mL/min，上样量为20μL，流动相A为含0.065%TFA的2%乙腈水溶液，流动相B为含0.05%TFA的乙腈。