[发明专利]一种多样本多片段DNA甲基化高通量测序方法

摘要

本发明的一种多样本多片段DNA甲基化高通量测序方法，能够在一个文库中同时分析多个样本、多个目标片段的DNA甲基化状态，片段长度可以达到500bp左右，并且PCR重组发生率低，该方法还具有起始样本量少、针对性强、成本低、充分利用测序通量等优点。

主权项

一种多样本多片段DNA甲基化高通量测序方法，其特征在于由以下步骤组成：步骤一：提取基因组DNA，对基因组DNA进行重亚硫酸盐处理，然后对处理好的基因组DNA进行PCR扩增，其中针对不同基因片段使用不同的PCR引物，相同的基因片段使用标签序列区分不同的样本，其中，不同基因是CDH13和SEPT9，CDH13的上游引物序列是TTTGGGAAGTTGGTTGGTTG，CDH13的下游引物序列是ACAACCCCTCTTCCCTACCT，SEPT9的上游引物序列是GTTATGTGGATTTTTTAAGTTAA，SEPT9的下游引物序列是AAAAACAAAAAACTCCATCCTCC，同时在上下游引物的5’端分别加上如下表所示的标签序列，含不同标签序列的上下游引物分别组合用以区分不同的样本步骤二：将步骤一中不同的PCR产物进行混合，使用混合好的PCR产物进行测序文库制备，其中文库制备利用如下步骤进行：步骤1，对混合后的PCR产物进行定量，进行文库制备；步骤2，将混合的PCR产物进行3’末端修复和3’末端添加碱基A；步骤3，将3’末端添加碱基A的产物连接测序接头，获得测序接头连接产物；步骤4，将测序接头连接产物进行PCR扩增，其中PCR循环数为6轮，获得测序文库；步骤三：对测序文库进行QPCR质检定量；步骤四：上机测序，对不同样本特异性片段甲基化状况进行高精度分析。