[发明专利]应用于组织样本中染色质超敏感位点DNase I酶切方法

摘要

本发明涉及一种应用于组织样本中染色质超敏感位点DNase I酶切方法，首先进行组织样本前处理，然后向组织样本中加入NEHB溶液和1.15％的KCL，用组织研磨器，在冰浴中研磨后，超速离心收集细胞核；再进行脱氧核糖核酸酶I酶切反应，纯化提取酶切DNA最后胶回收DNA片段。与现有技术相比，本发明对组织的细胞核的前期收集方法进行改进，并通过细胞核的数量，优化酶切反应条件，提高了DNase I的酶切效率；其次，采用DNase I的梯度酶切方法与高通量方法的结合，不仅能够有效的获取正确的染色质片段，而且能够降低由于前期研磨样本产生的假阳性，能够在精准定位转录调控元件在全基因组上的结合位点，提高了临床样本的研究进程。

主权项

一种应用于组织样本中染色质超敏感位点DNase I酶切方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)组织样本前处理：无菌条件下，取组织样本加预冷的含有蛋白抑制剂的PBS洗涤剂洗涤；(2)组织匀浆研磨收集细胞核：经过前处理的组织样本中加入NEHB溶液和1.15wt％的KCL，用组织研磨器，在冰浴中研磨后，超速离心收集细胞核；(3)脱氧核糖核酸酶I酶切反应：将细胞核用PBS洗涤2次后，悬浮在预冷的酶切消化缓冲液A中，37℃水浴2分钟，加入脱氧核糖核酸酶I，37℃酶切5分钟后，加入与脱氧核糖核酸酶I等量的酶切终止液；(4)纯化提取酶切DNA：步骤(3)所得液中加入核糖核酸酶，55℃孵育15分钟，再加蛋白酶K，55℃孵育2小时，用纯化液抽提DNA片段；(5)胶回收DNA片段：将抽提的DNA片段放置在2wt％的琼脂糖胶中，80V，1小时电泳，切胶回收150bp以下的DNA片段。