[发明专利]应用于组织样本中染色质超敏感位点DNase I酶切方法

权利要求书

1.一种应用于组织样本中染色质超敏感位点DNase I酶切方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)组织样本前处理：

无菌条件下，取组织样本加预冷的含有蛋白抑制剂的PBS洗涤剂洗涤；

(2)组织匀浆研磨收集细胞核：

经过前处理的组织样本中加入NEHB溶液和1.15wt％的KCL，用组织研磨器，在冰浴中研磨后，超速离心收集细胞核；

(3)脱氧核糖核酸酶I酶切反应：

将细胞核用PBS洗涤2次后，悬浮在预冷的酶切消化缓冲液A中，37℃水浴2分钟，加入脱氧核糖核酸酶I，37℃酶切5分钟后，加入与脱氧核糖核酸酶I等量的酶切终止液；

(4)纯化提取酶切DNA：

步骤(3)所得液中加入核糖核酸酶，55℃孵育15分钟，再加蛋白酶K，55℃孵育2小时，用纯化液抽提DNA片段；

(5)胶回收DNA片段：

将抽提的DNA片段放置在2wt％的琼脂糖胶中，80V，1小时电泳，切胶回收150bp以下的DNA片段。

2.根据权利要求1所述的一种应用于组织样本中染色质超敏感位点DNase I酶切方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的PBS洗涤剂中蛋白抑制剂cocktail的含量为1X，所述的蛋白抑制剂cocktail由AEBSF、EDTA、Leupeptin及Pepstatin A组成。

3.根据权利要求1所述的一种应用于组织样本中染色质超敏感位点DNase I酶切方法，其特征在于，步骤(2)所述的NEHB溶液具体包括：10mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、25mM KCl、0.15mM精胺、0.5mM亚精胺、1mM EDTA、2M蔗糖、10v/v％甘油、10mM NaF、1mM原钒酸盐、1mM苯甲基磺酰氟、0.5mM二硫苏糖醇以及1X蛋白酶抑制剂cocktail，其pH为7.9。

4.根据权利要求1所述的一种应用于组织样本中染色质超敏感位点DNase I酶切方法，其特征在于，步骤(2)所述的离心过程中采用25000rpm的转速。

5.根据权利要求1所述的一种应用于组织样本中染色质超敏感位点DNase I酶切方法，其特征在于，步骤(3)所述的酶切消化缓冲液A具体包括：15mM Tris-Cl、15mM NaCl、60mM KCl、1mM EDTA、0.5mM EGTA，其pH为8.0。

6.根据权利要求1所述的一种应用于组织样本中染色质超敏感位点DNase I酶切方法，其特征在于，步骤(3)所述的酶切终止液含有10mM Tris与5mM EDTA，pH为7.6。

7.根据权利要求1所述的一种应用于组织样本中染色质超敏感位点DNase I酶切方法，其特征在于，步骤(4)所述的纯化液为体积比25:24:1的酚、氯仿与异戊醇的混合液。