[发明专利]一种产小分子透明质酸的重组毕赤酵母及其构建方法

摘要

本发明公开了一种产小分子透明质酸的重组毕赤酵母及其构建方法，属于生物工程技术领域。本发明采用兽疫链球菌来源的透明质酸合酶hasA和枯草芽孢杆菌来源的UDP‑葡萄糖脱氢酶tuaD，重组Pichia pastoris GS115宿主中表达，实现了透明质酸的生产；同时，采用水蛭来源的透明质酸酶整合至毕赤酵母基因组上，分别置于不同强度的组成型启动子下分泌表达，通过控制透明质酸酶的分泌表达量来制备不同分子量大小的小分子透明质酸产物，制备的产物分子量范围有差异，对于微生物直接生产特定范围的小分子透明质酸具有重要的指导借鉴意义。本发明为高效制备小分子透明质酸奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。

主权项

一种重组毕赤酵母，其特征在于，是在毕赤酵母内表达了编码透明质酸合酶的基因hasA和UDP‑葡萄糖脱氢酶的基因tuaD以获得产透明质酸的途径，并偶联分泌表达透明质酸酶；所述透明质酸酶来源于水蛭，其基因序列如SEQ ID NO.5所示，融合启动子和信号肽后通过重组整合到毕赤酵母基因组进行表达；所述重组毕赤酵母以毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115为宿主；所述透明质酸合酶编码基因hasA序列如SEQ ID NO.1所示；所述UDP‑葡萄糖脱氢酶基因tuaD序列如SEQ ID NO.2所示；所述透明质酸酶基因分别采用不同强度的组成型启动子控制表达，包括GAP、TEF1或YPT1。