[发明专利]一种Indel分子标记芯片的利用方法

摘要

本发明公开了一种Indel分子标记芯片的利用方法，该方法依次包括如下步骤：根据Indel分子标记设计合成覆盖全基因组的Indel探针步骤；合成的Indel探针点样于基片的点样步骤；Indel分子标记芯片的固定步骤；在固定后的所述Indel分子标记芯片上进行杂交的步骤；杂交后的Indel分子标记芯片的洗脱与扫描步骤。该方法简单，容易在实验室中实现，是一个开放式、低成本的实用技术体系，可以应用于指纹鉴定、基因定位、基因聚合鉴定筛选、种子真实度鉴定、遗传背景鉴定及分子标记辅助育种等多个方面，特别地，本发明设计的Indel分子标记芯片可以用于鉴定和筛选黄瓜抗枯萎病和靶斑病基因。

主权项

一种Indel分子标记芯片的利用方法，其特征在于，依次包括如下步骤：根据Indel分子标记设计合成覆盖全基因组的Indel探针步骤；合成的Indel探针点样于基片的点样步骤：先将合成的Indel探针干粉用去离子水配制成浓度为18‑22μM的Indel探针溶液，再将所述探针溶液与点样缓冲液等体积混合均匀，然后将混合均匀的样品转移至多孔板上，并将基片置于点样仪上，按点样仪的点样程序将所述多孔板上的样品点样于基片上，从而得到Indel分子标记芯片；所述Indel分子标记芯片的固定步骤；在固定后的所述Indel分子标记芯片上进行杂交的步骤：首先，根据点样模式，在固定后的芯片周围贴上相应的围栏或反应舱，在所述围栏或反应舱内加入预杂交液，38‑42℃放置15‑20min后去除预杂交液；然后，将包含Indel分子标记的模板进行98℃10min变性，变性后即刻将装有所述模板的离心管置于冰水混合物中并于‑20℃条件下放置5‑10min；之后，向装有所述模板的离心管中加入杂交缓冲液，混合均匀后加入至已经过预杂交液处理的芯片的围栏或反应舱中，其中所述模板与杂交缓冲液的体积比为1:4‑6；最后，将芯片置于湿盒，在40℃～60℃烘箱中进行杂交，杂交时间为1～16h；杂交后的Indel分子标记芯片的洗脱与扫描步骤：吸去芯片上的溶液后加入洗液，于38‑42℃下放置5‑10min，再吸干或离心甩干芯片，进行基因芯片荧光扫描。