[发明专利]一种纸基微流控芯片增强型化学发光基因传感方法

摘要

本发明公开了一种纸基微流控芯片增强型化学发光检测hlyA基因的方法，该方法包括如下步骤：1、将网印板压在层析纸上，涂蜡，然后加热，层析纸从网印板上自然脱落，晾干；2、设计捕捉探针和信号探针；3、纸基微流控芯片的预处理；4、将待测DNA样品与捕捉探针孵育，加入信号探针与待测DNA样品杂交反应，再加入HRP-SA孵育；最后，加入底液触发增强型化学发光，发光信号由一台CCD数字成像设备成像采集。相比于昂贵且复杂的光学成像系统，本发明采用简单的CCD设备进行成像检测；将增强型化学发光体系和生物素-链霉亲和素亲和放大体系相结合，极大地提高了纸基微流控芯片化学发光的检测灵敏度，检测限可达6.3×10^-2pmol/L。

主权项

一种纸基微流控芯片增强型化学发光检测hlyA基因的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)制作纸基微流控芯片将网印板压在层析纸上，然后在网印板上涂蜡，将附着层析纸的网印板置于加热板上加热，带层析纸的一面朝向加热板；加热后，层析纸从网印板上自然脱落，室温冷却晾干；所述的将网印板置于加热板上加热，是100℃加热5s；(2)设计捕捉探针和信号探针捕捉探针的序列如SEQ ID NO.2所示，其3’端连接氨基；信号探针的序列如SEQ ID NO.3所示，其3’端连接生物素；(3)纸基微流控芯片的预处理将5μL0.3mol/L高碘酸钠溶液滴入纸基微流控芯片的反应池中；置于暗室中反应1h，采用Tris–HCl缓冲液冲洗4次；然后，将5μL5×10^‑7mol/L捕捉探针加入反应池中，孵育30min，采用40μL Tris–HCl缓冲液冲洗4次；最后，将5μL0.5mg/mL NaCNBH₃加入反应池中，孵育10min，采用40μL Tris–HCl缓冲液冲洗4次，室温晾干；(4)上样后的分析检测将5μL待测DNA样品加入反应池与捕捉探针进行杂交反应，孵育30min，采用Tris–HCl缓冲液冲洗4次；接着，将5μL5×10^‑7mol/L信号探针加入反应池与待测DNA样品杂交反应，孵育30min，采用Tris–HCl缓冲液冲洗4次；然后，将10μL HRP‑SA加入反应池，孵育40min，采用Tris–HCl缓冲液冲洗4次；最后，将10μL底液加入反应池，触发增强型化学发光，发光信号由一台CCD数字成像设备成像采集；若待测DNA样品的化学发光强度值大于1，说明待测DNA样品中含有hlyA基因；若待测DNA样品的化学发光强度值小于或等于1，说明待测DNA样品中不含有hlyA基因；化学发光强度值＝平均灰度值平均灰度值由系统自带的图像分析软件计算出；所述的底液由鲁米诺、过氧化氢、对碘苯酚和水组成；底液的pH值是7.5～9.0，底液中对碘苯酚的浓度是1×10^‑4mol/L～1×10^‑3mol/L。