[发明专利]B型肝炎病毒表面抗原基因中止型突变的侦测技术

摘要

本发明揭示一种于体外侦测一分离出的核苷酸检体具有一B型肝炎病毒表面抗原基因C端截断突变的方法。本发明亦揭示利用上述方法的体外诊断套组。

主权项

一种于体外侦测一被分离的核苷酸检体是否具有一可编码小表面蛋白的B型肝炎病毒表面抗原基因C端截断突变的方法，包括：a)提供第一组引子对和第二组引子对：该第一组引子对包括一第一前置引子和一反置引子；该第二组引子对包括一第二前置引子和一反置引子；其中，(i)该第一前置引子包括一段可黏合至S基因5'‑端的核苷酸序列，且该核苷酸序列的5'‑端标记有一FLAG标记序列；该反向引子具有可黏合至S基因3'‑端序列的特征；该第一组引子对具有产生一第一次聚合酶连锁反应产物的特征，该产物的5'‑端具有一FLAG标记序列；(ii)该第二前置引子包括一方向为5'端至3'端的一T7或一Sp6启动子序列、一Kozak序列及一3'‑端序列，该3'‑端序列可黏合至第一次PCR产物5'‑端FLAG标记序列；而该第二组引子对具有产生第二次PCR产物的特征：其5'‑端具有T7或Sp6启动子序列、具有Kozak序列和FLAG标记序列，其中该Kozak序列位在T7或Sp6启动子序列和FLAG标记序列之间；b)于一第一反应混合物中进行一第一次PCR，该混合物包括一分离出的核苷酸检体和第一组引子对来产生第一次PCR产物，其中该分离出的核苷酸检体来自于B型肝炎病毒带原者或疑似B型肝炎病毒带原者；c)于一第二反应混合物中进行一第二次PCR，该混合物包括第一次PCR产物和第二组引子对来产生第二次PCR产物；d)将该第二次PCR产物转译成一蛋白质；e)将该蛋白质的尺寸与控制组或野生型小表面蛋白的尺寸进行比较；及f)检测该核苷酸检体是否具有B型肝炎表面基因C端截断突变：当该蛋白质的尺寸相较于控制组或野生型的小表面蛋白尺寸有变小的状况，则该检体具有B型肝炎表面基因的C端截断突变。