[发明专利]B型肝炎病毒表面抗原基因中止型突变的侦测技术

权利要求书

1.一种于体外侦测一被分离的核苷酸检体是否具有一可编码小表面蛋白的B型肝炎病毒表面抗原基因C端截断突变的方法，包括：

a)提供第一组引子对和第二组引子对：该第一组引子对包括一第一前置引子和一反置引子；该第二组引子对包括一第二前置引子和一反置引子；其中，

(i)该第一前置引子包括一段可黏合至S基因5'-端的核苷酸序列，且该核苷酸序列的5'-端标记有一FLAG标记序列；该反向引子具有可黏合至S基因3'-端序列的特征；该第一组引子对具有产生一第一次聚合酶连锁反应产物的特征，该产物的5'-端具有一FLAG标记序列；

(ii)该第二前置引子包括一方向为5'端至3'端的一T7或一Sp6启动子序列、一Kozak序列及一3'-端序列，该3'-端序列可黏合至第一次PCR产物5'-端FLAG标记序列；而该第二组引子对具有产生第二次PCR产物的特征：其5'-端具有T7或Sp6启动子序列、具有Kozak序列和FLAG标记序列，其中该Kozak序列位在T7或Sp6启动子序列和FLAG标记序列之间；

b)于一第一反应混合物中进行一第一次PCR，该混合物包括一分离出的核苷酸检体和第一组引子对来产生第一次PCR产物，其中该分离出的核苷酸检体来自于B型肝炎病毒带原者或疑似B型肝炎病毒带原者；

c)于一第二反应混合物中进行一第二次PCR，该混合物包括第一次PCR产物和第二组引子对来产生第二次PCR产物；

d)将该第二次PCR产物转译成一蛋白质；

e)将该蛋白质的尺寸与控制组或野生型小表面蛋白的尺寸进行比较；及

f)检测该核苷酸检体是否具有B型肝炎表面基因C端截断突变：当该蛋白质的尺寸相较于控制组或野生型的小表面蛋白尺寸有变小的状况，则该检体具有B型肝炎表面基因的C端截断突变。

2.如权利要求1所述的方法，其中该HBV S基因的C-端截断突变系选自由sL15*、sL21*、sS61*、sC69*、sL95*、sW156*、sW163*、sW172*、sW182*、sW196*和sL216*组成的群组。

3.如权利要求1所述的方法，其中该核苷酸样本系取自一疑似受到B型肝炎病毒感染或肝细胞癌的病患、或肝功能不正常的病患、或有肝硬化的病患。

4.如权利要求1所述的方法，其中该核苷酸样本系萃取自于一新鲜的冷冻肝组织、一福尔马林固定的石蜡组织切片或一血液样本。

5.如权利要求1所述的方法，其中该第一次PCR产物延展HBV S基因以编码小表面蛋白序列，该序列延展的范围至少为编号2号氨基酸序列(SEQ ID NO:2)的氨基酸位置123到227的长度；且该第一次PCR产物的5'-端标示有一FLAG标记序列。

6.如权利要求1所述的方法，其中该第一次PCR产物延展HBV S基因中负责编码小表面蛋白的序列，该序列延展的范围由SEQ ID NO:2的氨基酸位置30到227，或由SEQ ID NO:2的氨基酸位置123到227。

7.如权利要求1所述的方法，其中该Kozak共有序列为SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6。

8.如权利要求1所述的方法，其中

a)该第一组引子对的第一前置引子包括由SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:16组成之一核苷酸序列；

b)该第二组引子对的第二前置引子包括由SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:17组成之一核苷酸序列；及

c)该反置引子包括SEQ ID NO:9核苷酸序列。