[发明专利]一种靛玉红衍生物的制备方法及其产物和应用

摘要

发明提供一种靛玉红衍生物的制备方法及其产物和应用，该方法通过特殊诱导子提高微生物对靛玉红的生物转化，同时得到多种、高产率的基于靛玉红的羟基、甲基和或磺酸化修饰的化合物。本发明方法绿色环保、选择性强、产率高，能够大规模利用微生物制备雷公藤红素衍生物，且制备的靛玉红衍生物具有高效、低毒等特点，具有抑制肿瘤、抑制艾滋病和乙肝病毒、抑制心肌缺血再灌注和扩张性心肌病损伤的良好作用。

主权项

一种靛玉红衍生物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：取靛玉红15～20mg，溶解于150～200mL乙酸乙酯，使靛玉红浓度为0.1mg/mL；另取磷脂550～572mg，使靛玉红与磷脂摩尔比为1:10混合，60℃搅拌反应2.0h，反应完毕，除去乙酸乙酯，残余物用适量正己烷溶解后，离心后取上清液，将上清液转移至真空干燥器中减压干燥，所得紫红色半固体产物即为靛玉红磷脂复合物；步骤二：取保存于4℃、土豆斜面培养基培养的、转化菌种一支，置于25℃恒温培养箱中培养7天后，以适量无菌水将斜面上的孢子充分吹打下来，使单孢子悬液的浓度调整至107～108个/mL，既得种子孢子液；步骤三：以100ml，5mL的接种量，在土豆液体培养基上接种步骤二所得孢子液，在pH至6.0，温度30℃ ±1℃，振荡速度为200r/min条件下培养12h后；按0.1～4ug的接种量，加入各种不同比例的联合诱导子，继续培养12h后，再按1～10ug的接种量加入步骤一所得的靛玉红磷脂复合物，然后继续培养5天，每天检测各种靛玉红衍生物的含量和转化率，当产物转化率低至0.5～3%时，停止培养，过滤后收集菌丝体，然后将滤液于8000r/min,离心10min去除沉淀既得到发酵提取液；步骤四：将步骤三提取液过滤，滤液用等体积的乙酸乙酯萃取3遍，合并萃取液；而菌丝体则用与其重量比为1:3～1:10的乙酸乙酯超声提取30min，然后滤去菌丝体，所得滤液与萃取液合并，既得分离提取液；步骤五：将经过步骤四处理所得的分离提取液，先用1mg：1～10mL的乙醇溶解后，采用硅胶拌样后挥干，称取20倍于样品量的硅胶，使用湿法进行填柱和上样；首先用5倍柱体积的100%石油醚将样品中低极性油类物质洗脱干净，再依次用以下6种洗脱液进行洗脱:体积比为5:3、5:4、1:1、1:2的石油醚：二氯甲烷洗脱液，二氯甲烷洗脱液，体积比为5:1、5:2、1:1、1:3、1:5的二氯甲烷：乙酸乙酯洗脱液，乙酸乙酯洗脱液，体积比为5:2、5:4、1:1、1:2的乙酸乙酯：甲醇洗脱液，以及甲醇洗脱液；然后TLC控制 收集主馏分，使用旋转蒸发仪将各个馏分溶液蒸干后，用适量甲醇溶解，再用0.22μm的滤膜过滤后，即得各种靛玉红衍生物分离液；步骤六：将经过步骤五处理所得的各种靛玉红衍生物分离液，采用高效液相半制备法分离纯化，HPLC梯度洗脱法控制收集不同的靛玉红衍生物洗脱液，减压蒸去溶剂后，用甲醇结晶，即得靛玉红衍生物。