[发明专利]通过单点突变缺失结构中的盐键提高PAE酶活的方法有效

专利信息
申请号: 201310368569.9 申请日: 2013-08-21
公开(公告)号: CN103451173A 公开(公告)日: 2013-12-18
发明(设计)人: 边斐;毕玉平;彭振英;杨连群;于金慧;宣宁;张燕 申请(专利权)人: 山东省农业科学院生物技术研究中心
主分类号: C12N9/66 分类号: C12N9/66;C12N15/57;C12N15/70
代理公司: 济南舜源专利事务所有限公司 37205 代理人: 宋玉霞
地址: 250100 山东*** 国省代码: 山东;37
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明提供一种通过单点突变缺失结构中的盐键提高PAE酶活的方法。利用定点突变技术,通过缺失催化腔附近的单个盐键,将形成盐键3的Asp201-Arg205中的Asp201定点突变为Ala,构建突变体D201A,提高了PAE的活力。本发明不但对揭示M4家族金属蛋白酶的结构和功能关系具有重要意义,同时,由于很多M4家族蛋白酶是重要的医学、工业用酶,因此本发明对该家族蛋白酶的分子改造研究和相关新产品的开发也具有重要指导意义。
搜索关键词: 通过 单点 突变 缺失 结构 中的 提高 pae 方法
【主权项】:
1.一种通过单点突变缺失结构中的盐键提高PAE酶活的方法,其特征在于,PAE中残基正负电荷间距离小于4,不考虑His形成的盐键之外含有6个盐键,盐键1-3位于催化腔附近,盐键4-6位于C端结构域的C末端,将形成盐键3的Asp201-Arg205中的Asp201进行定点突变,提高PAE比活力。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东省农业科学院生物技术研究中心,未经山东省农业科学院生物技术研究中心许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201310368569.9/,转载请声明来源钻瓜专利网。

同类专利
  • 一种利用微生物液态发酵生产弹性蛋白酶酶制剂的方法-201310398828.2
  • 高兆建;张桂英;张建萍;侯进慧;陈尚龙;张从省 - 徐州工程学院
  • 2013-09-05 - 2014-03-12 - C12N9/66
  • 发明涉及一种利用微生物液态发酵生产弹性蛋白酶酶制剂的方法,其特征在于选用地衣芽孢杆菌(Baclicus lincheniformis)ELAT4(CGMCC5700)作为弹性蛋白酶生产的菌种,经地衣芽孢杆菌菌种活化、种子液制备、发酵液培养、深层液体通风发酵和弹性蛋白酶酶制剂成品制备步骤,而制得弹性蛋白酶酶制剂。本发明制得的液体酶活力达到352U/ml、固体酶制剂酶活力达到2512u/g。本发明具有提高产弹性蛋白酶的效率、增强弹性蛋白酶的活性和降低生产成本的优点,且生产过程无废固物处理问题,对环境无污染。本发明适用于大批量生产弹性蛋白酶。
  • 一种深海弹性蛋白酶的低成本制备方法-201310228836.2
  • 张玉忠;赵慧琳;杨洁;陈秀兰;秦启龙;苏海楠;解彬彬;张熙颖;周百成 - 山东大学
  • 2013-06-08 - 2013-09-25 - C12N9/66
  • 本发明涉及一种深海弹性蛋白酶的低成本制备方法,步骤如下:(1)将深海细菌接种于液体种子培养基,经培养,获得种子培养液;(2)将种子培养液接种于发酵培养基,经发酵培养后,离心取上清,制得发酵液;(3)将发酵液过夜透析,离心,经DEAE-Sepharose Fast Flow层析后经梯度洗脱,取第一个洗脱峰的洗脱液,制得深海细菌弹性蛋白酶。本发明用屠宰厂副产品牛心管代替弹性蛋白,进行细菌菌株CF6-2胞外弹性蛋白酶的产酶发酵,发酵成本降低70%以上,具有很好的环境效益和社会效益。
  • 基因重组人中性粒细胞弹性蛋白酶及其制备方法和该弹性蛋白酶的医药用途-201110163759.8
  • 阎智慧;张楷 - 天津金斯坦生物科技有限公司
  • 2011-06-17 - 2011-11-23 - C12N9/66
  • 本发明公开了一种基因重组人中性粒细胞弹性蛋白酶及其制备方法和该弹性蛋白酶的医药用途,属于基因工程领域。本发明利用人中性粒细胞裂解液,取含有基因组DNA的上清液,扩增获得中性粒细胞弹性蛋白酶的基因片段ELA2,连接克隆质粒转化大肠杆菌,构建弹性蛋白酶的PET-28a-ELA2表达质粒,在大肠杆菌中表达弹性蛋白酶,收集菌体,超声裂解菌液,镍柱洗脱后获得纯化的弹性蛋白酶。这样设计的本发明,利用弹性蛋白酶的表达基因,获得足量稳定的基因重组人中性粒细胞弹性蛋白酶,为临床检测和试验研究提供弹性蛋白酶原料,并为制备弹性蛋白酶高效抗体提供特异性抗原。
  • 可高效水解淡水鱼及鱼类下脚料的蛋白酶生产方法-200910112854.8
  • 倪辉;蔡慧农;肖安风;李利君;杨远帆 - 集美大学
  • 2009-11-12 - 2010-05-12 - C12N9/66
  • 本发明公开了一种新型蛋白酶的生产方法,用该方法生产出的蛋白酶具有较强的弹性蛋白酶活性,能高效地水解淡水鱼及鱼类加工下脚料。该蛋白酶的生产方法可概述为:用不含有机氮源的培养基培养枯草芽孢杆菌至对数生长期,加入从鱼鳞或鱼皮提取的胶原蛋白及triton-100,将发酵温度提高2-3℃,继续发酵16h,弹性蛋白酶活力可达到650U/mL,总蛋白酶活力可达到2216U/mL;提取蛋白酶并制成粉状酶制剂,该酶制剂的总蛋白酶活力为1.8万U/g,弹性蛋白酶活力为5423U/g;用该蛋白酶制剂对淡水鱼及鱼类加工下脚料进行水解,可大大提高水解效率。
专利分类
×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

400-8765-105周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top