[发明专利]多肽微阵列芯片在血浆中检测凝血酶活性及筛选凝血酶抑制剂的方法

摘要

本发明公开了一种多肽微阵列芯片在血浆中检测凝血酶活性及筛选凝血酶抑制剂的方法，解决了现有分析化学中凝血酶的检测方法不适用于血液凝结环境中凝血酶的检测及凝血酶抑制剂的筛选的技术问题。本发明将多肽微阵列芯片与激活的血浆或者与含有凝血酶抑制剂的激活的血浆在36-38°C反应40min以上，然后与亲和素反应1h以上，再与多肽修饰的金纳米粒子反应1h以上，检测多肽微阵列芯片上金纳米粒子的共振光散射信号，实现凝血酶活性的检测及凝血酶抑制剂的筛选。本发明可直接在血浆中检测凝血酶活性，初步区分普通血浆、高凝血浆和低凝血浆；并且在血液凝结环境下，筛选凝血酶抑制剂，为凝血酶抑制剂类药物的开发和应用提供基础。

主权项

多肽微阵列芯片在血浆中检测凝血酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将多肽微阵列芯片与激活的血浆在36‑38°C反应40min以上，得到反应后的多肽微阵列芯片；所述多肽微阵列芯片以生物素修饰的多肽为底物，所述多肽的氨基酸序列为Cys‑Ala‑Glu‑Gly‑Gly‑Gly‑Val‑Arg‑Gly‑Pro‑Arg‑Val‑Val‑Lys，Cys‑Glu‑Gly‑Phe‑Phe‑Ser‑Ala‑Arg‑Gly‑His‑Arg‑Pro‑Leu‑Lys，Cys‑Ala‑Glu‑Gly‑Gly‑Val‑Pro‑Arg‑Ser‑Phe‑Arg‑Val‑Val‑Lys，Cys‑Ala‑Glu‑Gly‑Gly‑Phe‑Pro‑Arg‑Ser‑Phe‑Arg‑Val‑Val‑Lys，Cys‑Ala‑Glu‑Gly‑Gly‑Val‑Pro‑Arg‑Ser‑Phe‑Lys‑Val‑Val‑Lys，Cys‑Gly‑Gly‑Gly‑Ala‑Arg‑Pro‑Arg‑Ser‑Leu‑Leu‑Val‑Gly‑Lys，Cys‑Ala‑Glu‑Gly‑Gly‑D‑Phe‑Pro‑Arg‑Ser‑Phe‑Arg‑Val‑Val‑Lys或者Cys‑Gly‑Gly‑Gly‑Val‑Arg‑Pro‑Gly‑Arg‑Val‑Gly‑Gly‑Gly‑Glu‑Ala‑Leu‑Phe‑Asp‑Lys，其中，生物素均修饰在末端赖氨酸上，D‑Phe为D型苯丙氨酸，其它氨基酸均为L型氨基酸；(2)将反应后的多肽微阵列芯片与亲和素反应1h以上，再与多肽修饰的金纳米粒子反应1h以上，得到金纳米粒子标记的多肽微阵列芯片；所述多肽修饰的金纳米粒子为Cys‑Ala‑Leu‑Asn‑Asn与Cys‑Ala‑Leu‑Asn‑Asn‑Gly‑Lys‑Gly修饰的金纳米粒子，其中，Lys上修饰有生物素；(3)检测金纳米粒子标记的多肽微阵列芯片上金纳米粒子的共振光散射信号，实现对凝血酶活性的检测。