[发明专利]多肽微阵列芯片在血浆中检测凝血酶活性及筛选凝血酶抑制剂的方法

权利要求书

1.多肽微阵列芯片在血浆中检测凝血酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将多肽微阵列芯片与激活的血浆在36-38°C反应40min以上，得到反应后的多肽微阵列芯片；

所述多肽微阵列芯片以生物素修饰的多肽为底物，所述多肽的氨基酸序列为Cys-Ala-Glu-Gly-Gly-Gly-Val-Arg-Gly-Pro-Arg-Val-Val-Lys，Cys-Glu-Gly-Phe-Phe-Ser-Ala-Arg-Gly-His-Arg-Pro-Leu-Lys，Cys-Ala-Glu-Gly-Gly-Val-Pro-Arg-Ser-Phe-Arg-Val-Val-Lys，Cys-Ala-Glu-Gly-Gly-Phe-Pro-Arg-Ser-Phe-Arg-Val-Val-Lys，Cys-Ala-Glu-Gly-Gly-Val-Pro-Arg-Ser-Phe-Lys-Val-Val-Lys，Cys-Gly-Gly-Gly-Ala-Arg-Pro-Arg-Ser-Leu-Leu-Val-Gly-Lys，Cys-Ala-Glu-Gly-Gly-D-Phe-Pro-Arg-Ser-Phe-Arg-Val-Val-Lys或者Cys-Gly-Gly-Gly-Val-Arg-Pro-Gly-Arg-Val-Gly-Gly-Gly-Glu-Ala-Leu-Phe-Asp-Lys，其中，生物素均修饰在末端赖氨酸上，D-Phe为D型苯丙氨酸，其它氨基酸均为L型氨基酸；

(2)将反应后的多肽微阵列芯片与亲和素反应1h以上，再与多肽修饰的金纳米粒子反应1h以上，得到金纳米粒子标记的多肽微阵列芯片；

所述多肽修饰的金纳米粒子为Cys-Ala-Leu-Asn-Asn与Cys-Ala-Leu-Asn-Asn-Gly-Lys-Gly修饰的金纳米粒子，其中，Lys上修饰有生物素；

(3)检测金纳米粒子标记的多肽微阵列芯片上金纳米粒子的共振光散射信号，实现对凝血酶活性的检测。

2.根据权利要求1所述的多肽微阵列芯片在血浆中检测凝血酶活性的方法，其特征在于，所述多肽微阵列芯片的多肽点阵浓度为0.1-2mg/mL。

3.根据权利要求1所述的多肽微阵列芯片在血浆中检测凝血酶活性的方法，其特征在于，所述多肽微阵列芯片与激活的血浆在37°C反应40min。

4.根据权利要求1所述的多肽微阵列芯片在血浆中检测凝血酶活性的方法，其特征在于，所述亲和素的浓度为3μM以上。

5.根据权利要求1所述的多肽微阵列芯片在血浆中检测凝血酶活性的方法，其特征在于，所述多肽修饰的金纳米粒子的浓度为3nM以上。

6.根据权利要求1所述的多肽微阵列芯片在血浆中检测凝血酶活性的方法，其特征在于，所述金纳米粒子的平均粒径为25-30nm。

7.根据权利要求1所述的多肽微阵列芯片在血浆中检测凝血酶活性的方法，其特征在于，所述激活的血浆的体积为30μL。

8.根据权利要求1所述的多肽微阵列芯片在血浆中检测凝血酶活性的方法，其特征在于，所述激活的血浆是采用以下方法制备的：向血浆中加入稀释缓冲液、重组人组织因子、磷脂混合物和氯化钙。