[发明专利]一种多拷贝的金属硫蛋白重组表达载体及其高效表达金属硫蛋白的方法

摘要

本发明提供一种多拷贝的金属硫蛋白重组表达载体及其高效表达金属硫蛋白的方法，属于生物化学技术领域，该方法是构建多拷贝的金属硫蛋白重组表达载体；将构建的重组表达载体转化毕赤酵母GS115或KM71中，在不含组氨酸的培养基上筛选到重组菌；将筛选到的重组菌接种于BMGY培养液，快速振荡培养，离心收集菌体，用培养液重悬，稀释，快速振荡培养至对数期加入甲醇，流加甲醇继续培养；收集菌体，超声破碎，离心收集上清，可从上清中分离纯化到金属硫蛋白。本发明方法克服了传统金属硫蛋白制备方法的不足，有效避免了大量动物资源的浪费、细菌源内毒素污染，降低了生产成本，提高了蛋白产量。

主权项

一种多拷贝的金属硫蛋白重组表达载体，其特征在于：该重组表达载体的获得方法是：将按照毕赤酵母密码子偏好性重新设计金属硫蛋白的编码序列，将所设计的金属硫蛋白基因插入载体pAO815上的EcoRI位点后，得到含单拷贝金属硫蛋白表达盒的表达载体，用限制性内切酶BglⅡ及BamHⅠ从得到的单拷贝表达载体上分离金属硫蛋白表达盒，将其再次插入到单拷贝表达载体的BamHⅠ位点，得到两个金属硫蛋白表达盒串联在一起的表达载体，重复上述插入程序构`建出多拷贝表达的金属硫蛋白表达盒数目逐渐增加的重组表达载体。