[发明专利]从麦曲中提取微生物总DNA的方法

摘要

本发明公开了一种从麦曲中提取微生物总DNA的方法，包括以下步骤：①向固体麦曲中加入Tris-EDTA浸泡，浸泡液多次离心，所得沉淀重悬在Tris-EDTA中；②加入溶菌酶和蛋白酶K孵育；③加入SDS溶液孵育；④加入NaCl溶液和CTAB孵育；⑤加入由酚、氯仿和异丙醇混合而得的试剂混合液，离心；⑥将步骤⑤离心所得的上清液加入氯仿后，离心；⑦将步骤⑥离心所得的上清液加入异丙醇，沉淀30～40min；⑧将步骤⑦的所得物离心，去上清；再加入乙醇后，离心，去上清，干燥；⑨在步骤⑧所得的沉淀中加入Tris-EDTA溶解后，取1μl测浓度，其余于-20℃保存备用。

主权项

从麦曲中提取微生物总DNA的方法，其特征是依次包括以下步骤：①、向1g固体麦曲中加入2.5～3.5ml的Tris‑EDTA浸泡，均匀混合后静置；吸取浸泡液；将浸泡液低速离心，得首次上清液；将首次上清液高速离心，得沉淀；将沉淀重悬在180～220μl的Tris‑EDTA中，均匀混合；②、将20ul浓度为15‑20mg/ml的溶菌酶和20ul浓度为15‑20mg/ml蛋白酶K加入到步骤①所得的产物中，于36.5～37.5℃孵育20～40min；③、向步骤②所得的产物中加入50～70μl质量浓度为10％的SDS溶液，于36.5～37.5℃孵育20～40min；④、向步骤③所得的产物中加入140～160μl浓度为5mol/l的NaCl溶液，涡旋震荡，混匀；再加入140～150μl提前预热至60～70℃的CTAB，于60～70℃孵育7～13min；⑤、向步骤④所得的产物中加入等体积的试剂混合液，上下颠倒混匀，于3～5℃10000～14000rcf/min离心10～20min；所述试剂混合液由酚：氯仿：异丙醇按照25∶24∶1的体积比混合而得；⑥、将步骤⑤离心所得的上清液转移到新的离心管并加入等体积氯仿，于3～5℃10000～14000rcf/min离心10～20min；⑦、将步骤⑥离心所得的上清液转移到新的离心管并加入400～600μl的异丙醇，上下颠倒混匀后，‑18～‑22℃沉淀30～40min；⑧、将步骤⑦的所得物于3～5℃10000～14000rcf/min离心10～20min，去上清；再加入体积浓度为70～80％的乙醇0.8～1.2ml，于3～5℃10000～14000rcf/min离心10～20min；去上清，并在室温下干燥10～20min；⑨、在步骤⑧所得的沉淀中加入50～100μl的Tris‑EDTA溶解后，取1μl测浓度，其余于‑20℃保存备用。