[发明专利]从麦曲中提取微生物总DNA的方法

权利要求书

1.从麦曲中提取微生物总DNA的方法，其特征是依次包括以下步骤：

①、向1g固体麦曲中加入2.5～3.5ml的Tris-EDTA浸泡，均匀混合后静置；吸取浸泡液；

将浸泡液低速离心，得首次上清液；

将首次上清液高速离心，得沉淀；

将沉淀重悬在180～220μl的Tris-EDTA中，均匀混合；

②、将20ul浓度为15-20mg/ml的溶菌酶和20ul浓度为15-20mg/ml蛋白酶K加入到步骤①所得的产物中，于36.5～37.5℃孵育20～40min；

③、向步骤②所得的产物中加入50～70μl质量浓度为10％的SDS溶液，于36.5～37.5℃孵育20～40min；

④、向步骤③所得的产物中加入140～160μl浓度为5mol/l的NaCl溶液，涡旋震荡，混匀；再加入140～150μl提前预热至60～70℃的CTAB，于60～70℃孵育7～13min；

⑤、向步骤④所得的产物中加入等体积的试剂混合液，上下颠倒混匀，于3～5℃10000～14000rcf/min离心10～20min；所述试剂混合液由酚：氯仿：异丙醇按照25∶24∶1的体积比混合而得；

⑥、将步骤⑤离心所得的上清液转移到新的离心管并加入等体积氯仿，于3～5℃10000～14000rcf/min离心10～20min；

⑦、将步骤⑥离心所得的上清液转移到新的离心管并加入400～600μl的异丙醇，上下颠倒混匀后，-18～-22℃沉淀30～40min；

⑧、将步骤⑦的所得物于3～5℃10000～14000rcf/min离心10～20min，去上清；再加入体积浓度为70～80％的乙醇0.8～1.2ml，于3～5℃10000～14000rcf/min离心10～20min；去上清，并在室温下干燥10～20min；

⑨、在步骤⑧所得的沉淀中加入50～100μl的Tris-EDTA溶解后，取1μl测浓度，其余于-20℃保存备用。

2.根据权利要求1所述的从麦曲中提取微生物总DNA的方法，其特征是：

所述步骤①低速离心为300～500rcf/min离心4～6min；高速离心为12000～14000rcf/min离心0.8～1.2min。