[发明专利]一种禾谷镰刀菌的分子检测方法及应用

摘要

本发明属于作物病害诊断与防治技术领域，具体涉及一种禾谷镰刀菌的分子检测方法及应用。该方法利用自行设计的一对PCR特异扩增引物，可从中国和国外采集到的镰刀菌中检测分离得到禾谷镰刀菌的特异片段，该片段全长为311bp。本发明可直接从麦穗、种子、饲料中快速、灵敏、准确检测出赤霉病致病菌禾谷镰刀菌。

主权项

一种禾谷镰刀菌的分子检测方法，其特征在于由以下步骤构成：（1）禾谷镰刀菌检测的特殊引物设计，根据禾谷镰刀菌DNA序列的特性，设计了对禾谷镰刀菌具有特异扩增作用的一对引物：上游引物5′‑GAGTCCAAACCGGATACGTCACGCT‑3′和下游引物5′‑TGCGTACGAATTGCAGAAGATGTCC‑3′；（2）禾谷镰刀菌检测体系的建立，提取病原菌基因组DNA；PCR反应体系20μL，包括DNA 10‑20ng, 2μL 10×buffer, 1.6μL 2.5mmol/L dNTP, 1.2μL 25mmol/L MgCl2 , 2.5μmol/L 上游及下游引物各2μL, 1.0 U Taq酶， ddH2O补齐至20μL；PCR扩增条件为第一循环95℃预变性5min；然后95℃变性45sec, 60℃退火30sec , 72℃ 延伸45sec，共35个循环；最后一个循环为72℃延伸10 min，完成扩增，扩增产物4℃保存；PCR扩增产物在2%琼脂糖凝胶中用1´TAE缓冲液中电泳30min，电压为4‑5V/cm，电泳结束后用凝胶成像系统分析；311bp处出现特异条带，说明该病原菌为禾谷镰刀菌。