[发明专利]一种禾谷镰刀菌的分子检测方法及应用

权利要求书

1.一种禾谷镰刀菌的分子检测方法，其特征在于由以下步骤构成：

（1）禾谷镰刀菌检测的特殊引物设计，根据禾谷镰刀菌DNA序列的特性，设计了对禾谷镰刀菌具有特异扩增作用的一对引物：上游引物5′-GAGTCCAAACCGGATACGTCACGCT-3′和下游引物5′-TGCGTACGAATTGCAGAAGATGTCC-3′；

（2）禾谷镰刀菌检测体系的建立，提取病原菌基因组DNA；PCR反应体系20μL，包括DNA 10-20ng, 2μL 10×buffer, 1.6μL 2.5mmol/L dNTP, 1.2μL 25mmol/L MgCl₂ , 2.5μmol/L 上游及下游引物各2μL, 1.0 U Taq酶， ddH₂O补齐至20μL；PCR扩增条件为第一循环95℃预变性5min；然后95℃变性45sec, 60℃退火30sec , 72℃ 延伸45sec，共35个循环；最后一个循环为72℃延伸10 min，完成扩增，扩增产物4℃保存；PCR扩增产物在2%琼脂糖凝胶中用1′TAE缓冲液中电泳30min，电压为4-5V/cm，电泳结束后用凝胶成像系统分析；311bp处出现特异条带，说明该病原菌为禾谷镰刀菌。

2.2．权利要求1所述禾谷镰刀菌的分子检测方法在禾谷镰刀菌的鉴别或禾谷镰刀菌在农作物或饲料污染监控中的应用。