[发明专利]一种应答水稻白叶枯病菌的基因芯片的制备方法及其基因芯片与应用

摘要

本发明是一种应答水稻白叶枯病菌的基因芯片的制备方法及其基因芯片与应用。该制备方法包括将均一化的cDNA文库的cDNA质粒和差减cDNA文库的cDNA质粒贮存在384孔板的孔中，并依次编号；用SSC作为阴性对照，用β-actin的cDNA为阳性对照，按编号顺序依次将所提取的均一化的cDNA文库的cDNA质粒和差减cDNA文库的cDNA质粒，阴性对照和阳性对照在一张载体上制成所述的基因芯片。该基因芯片中的cDNA类型更能全面反映与抗水稻白叶枯病有关的基因cDNA，在后续应用中保证最大限度地检测、筛选出抗水稻白叶枯病相关基因。其cDNA平均程度为500bp，应用时特异性更好，提高了检测利用效率。

主权项

一种应答水稻白叶枯病菌的基因芯片的制备方法，包括以下步骤：（1）构建cDNA文库以接种蒸馏水的水稻叶片和接种Xoo后24h、48h、72h的水稻叶片作为总RNA的提取材料，构建cDNA文库；（2）均一化步骤（1）构建的cDNA文库；（3）构建差减cDNA文库以接种Xoo后24h、48h、72h、96h和120h的水稻叶片等量取材作为接种样品，以接种样品作为差减杂交的试验方, 接种蒸馏水的水稻叶片等量取材作为驱动方，构建差减cDNA文库；（4）将步骤（2）均一化的cDNA文库的cDNA质粒和步骤（3）差减cDNA文库的cDNA质粒， 贮存在384孔板的孔中，并从第1块384孔板的第1个孔开始依次编号；用SSC作为阴性对照，用β‑actin 的cDNA为阳性对照，β‑actin 在GenBank库登录号是XM‑469569.1，阴性对照和阳性对照在cDNA质粒之后依次贮存在384孔板的孔中，并依次编号；（5）重复步骤（4）提取cDNA质粒，按步骤（4）的编号顺序依次将所提取的cDNA质粒、所述的阴性对照和阳性对照用生物芯片点样仪点在一张载体上，cDNA质粒不设重复，所述的阴性对照和阳性对照各设8个重复。