[发明专利]一种以介孔分子筛-壳聚糖为载体固定化果糖基转移酶的制备方法

摘要

一种以介孔分子筛-壳聚糖为载体固定化果糖基转移酶的制备方法，属于食品酶工程技术领域。本发明先以介孔分子筛SBA-15为载体，将酶蛋白吸附于该载体上，再加入壳聚糖以及双功能试剂戊二醛进一步吸附并交联，通过两步吸附-交联法进行了果糖基转移酶的固定化，使酶分子牢固地固定于载体上。固定化酶的酶活回收率可达75%以上，热稳定性和pH稳定性都优于游离酶。本发明相对其他固定化方法操作简单，条件温和，成本较低，酶分子不易泄漏，固定化效果好；产品固定化果糖基转移酶可应用于高纯度低聚果糖的生产。

主权项

一种以介孔分子筛 壳聚糖为载体固定化果糖基转移酶的制备方法，其特征在于先以介孔分子筛SBA 15为载体，将酶蛋白吸附于该载体上，再加入壳聚糖以及双功能试剂戊二醛进一步吸附并交联，通过两步吸附 交联法进行了果糖基转移酶的固定化，使酶分子牢固地固定于载体上，步骤如下：（1）载体吸附酶蛋白：将总酶活300 400U果糖基转移酶用18mL 50mM、pH 5.0 7.0的柠檬酸 磷酸缓冲液稀释，再与30 50mg的介孔分子筛SBA 15混合后，置于恒温振荡器中，室温下以恒定转速振荡吸附2 6h；（2）吸附 交联：取1mL质量浓度为1.0% 3.0%的壳聚糖的1%冰醋酸溶液，加入到步骤（1）所得固定化酶体系中；随后再加入1mL质量浓度为0.5% 2.5%的双功能试剂戊二醛水溶液，置于恒温振荡器中震荡2 6h，取出，高速离心机离心5 10min，除去未固定化部分，转移上清液，用50mM pH5.0 7.0的柠檬酸 磷酸缓冲液洗涤沉淀，再次离心，用上述柠檬酸 磷酸缓冲液重复洗涤3次，即制得产品以介孔分子筛 壳聚糖为载体固定化果糖基转移酶，储藏于4℃冰箱中备用。