[发明专利]一种以介孔分子筛-壳聚糖为载体固定化果糖基转移酶的制备方法

权利要求书

1.一种以介孔分子筛-壳聚糖为载体固定化果糖基转移酶的制备方法，其特征在于先以介孔分子筛SBA-15为载体，将酶蛋白吸附于该载体上，再加入壳聚糖以及双功能试剂戊二醛进一步吸附并交联，通过两步吸附-交联法进行了果糖基转移酶的固定化，使酶分子牢固地固定于载体上，步骤如下：

（1）载体吸附酶蛋白：将总酶活300-400U果糖基转移酶用18mL 50mM、pH 5.0-7.0的柠檬酸-磷酸缓冲液稀释，再与30-50mg的介孔分子筛SBA-15混合后，置于恒温振荡器中，室温下以恒定转速振荡吸附2-6h；

（2）吸附-交联：取1mL质量浓度为1.0%-3.0%的壳聚糖的1%冰醋酸溶液，加入到步骤（1）所得固定化酶体系中；随后再加入1mL质量浓度为0.5%-2.5%的双功能试剂戊二醛水溶液，置于恒温振荡器中震荡2-6h，取出，高速离心机离心5-10min，除去未固定化部分，转移上清液，用50mM pH5.0-7.0的柠檬酸-磷酸缓冲液洗涤沉淀，再次离心，用上述柠檬酸-磷酸缓冲液重复洗涤3次，即制得产品以介孔分子筛-壳聚糖为载体固定化果糖基转移酶，储藏于4℃冰箱中备用。

2.根据权利要求1所述以介孔分子筛-壳聚糖为载体固定化果糖基转移酶的制备方法，其特征在于所述的介孔分子筛SBA-15，其孔径大小为6-10nm。

3.根据权利要求1所述以介孔分子筛-壳聚糖为载体固定化果糖基转移酶的制备方法，其特征在于所得固定化果糖基转移酶的酶活回收率达75%以上，蛋白吸附量超过350mg蛋白/g载体，固定化酶重复利用10次后酶活仍保留70%以上，在4℃条件下储存60天后酶活仍保持85%以上。