[发明专利]一种利用酸菜发酵液分离提取小肽类天然食品防腐剂的方法

摘要

一种利用酸菜发酵液分离提取小肽类天然食品防腐剂的方法，它涉及一种提取食品防腐剂的方法。它解决了现有的酸菜水分离提取小肽类天然防腐剂的方法存在工艺不完善，产品的纯度、颜色、抑菌效果和产率不达标的问题。方法：一、制备酸菜水浓缩液；二、浓缩液盐析沉淀；三、盐析抑菌效果最佳的沉淀，进行透析，获得透析后样品；四、装柱层析后收集洗脱液；五、收集的洗脱液测定紫外吸光值，选择紫外吸光值≥0.2的洗脱液，喷雾干燥获得成品干粉，即完成。本发明突破以往小分子肽类食品防腐剂的研究方法，更新技术指标，完善技术路线，细化工艺，产率达标，纯度高，颜色呈浅乳白色，具有广谱抑菌效果。

主权项

一种利用酸菜发酵液分离提取小肽类天然食品防腐剂的方法，其特征在于利用酸菜发酵液分离提取小肽类天然食品防腐剂的方法按以下步骤进行：一、取500ml酸菜水在常温下5000～6000r/min离心处理30min，取上清液，采用抽真空水浴式旋转蒸发仪40℃减压浓缩5倍，得浓缩液；二、向100ml浓缩液中加入质量浓度为30％的硫酸铵并不断搅拌，盐析沉淀完全后于4℃下静止4h，然后4℃下30000r/min离心处理15min，分别标记离心管，然后取每管上清液和沉淀，分别采用琼脂扩散法进行抑菌试验，同时用质量浓度为30％的硫酸铵溶液做空白试验，测定上清液和沉淀的抑菌圈直径，将抑菌效果不明显的离心管中的上清液于4℃下加入质量浓度为40％的硫酸铵并不断搅拌，于4℃下静止过夜，然后4℃下30000r/min离心处理15min，分别标记离心管，然后取每管上清液和沉淀，分别采用琼脂扩散法进行抑菌试验，同时用质量浓度为40％的硫酸铵溶液做空白试验，测定上清液和沉淀的抑菌圈直径，将抑菌效果不明显的离心管中的上清液于4℃下加入质量浓度为50％的硫酸铵并不断搅拌，于4℃下静止过夜，然后4℃下30000r/min离心处理15min，分别标记离心管，然后取每管上清液和沉淀，分别采用琼脂扩散法进行抑菌试验，同时用质量浓度为50％的硫酸铵溶液做空白试验，测定上清液和沉淀的抑菌圈直径，将抑菌效果不明显的离心管中的上清液于4℃下加入质量浓度为60％的硫酸铵并不断搅拌，于4℃下静止过夜，然后4℃下30000r/min离心处理15min，分别标记离心管，然后取每管上清液和沉淀，分别采用琼脂扩散法进行抑菌试验，同时用质量浓度为60％的硫酸铵溶液做空白试验，测定上清液和沉淀的抑菌圈直径；三、收集步骤二中四次盐析抑菌效果最佳的离心管中的沉淀，加入到截留相对分子质量1200～1700的透析袋内，以Tris‑H3PO4为透析内液，蒸馏水作透析外液，4℃下透析，同时用氯化钡检测透析袋内没有BaSO4产生，即完成透析，获得透析后样品；四、CM Sephadex C‑25层析凝胶经预处理后装入层析柱，将透析后样品用Tris‑H3PO4稀释上样后，洗脱液使用顺序是先用40ml的HAC‑NaAC缓冲液，再用60ml浓度为0.02mol/L的KCl溶液，收集洗脱液；五、将收集的洗脱液在280nm下测定紫外吸光值，选择紫外吸光值≥0.2的洗脱液，然后进行喷雾干燥，获得成品干粉，即完成利用酸菜发酵液分离提取小肽类天然食品防腐剂；其中步骤二中测定上清液和沉淀的抑菌圈直径，抑菌效果不明显的均是指抑菌圈直径小于其空白试验的抑菌圈直径；步骤三中抑菌效果最佳的是指抑菌圈直径大于其空白试验的抑菌圈直径。