[发明专利]一种利用酸菜发酵液分离提取小肽类天然食品防腐剂的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提取食品防腐剂的方法。

背景技术

随着生活水平的不断提高，消费意识的不断明确，健康问题已经是生活中每天必然谈论的话题，然而目前的食品中主要添加的还是苯甲酸钠、山梨酸钾、亚硝酸盐等化学防腐剂，这些化学防腐剂虽然有较好的防腐保鲜的功效，但是不易代谢消化，随着在体内残留量的不断升高，容易引起机体细胞功能的紊乱，造成机体病变，严重的诱发癌变。

目前研究人员在L-乳酸菌发酵的酸菜水中发现了一种可以使未经灭菌的酸菜在常温下存放1.5年之久的物质，这种物质经鉴定是一种在食品中具有高效高活力防腐作用，而在体内可被分解为氨基酸的高安全小肽类物质，它就是小分子肽，抑菌范围、抑菌活力、安全性和适用范围等方面均比化学防腐剂突出。而且在中性条件下仍有很好的抑菌效果，是应用范围更广的天然防腐剂，完全无害。

在关于“酸菜水分离提取小肽类天然防腐剂”的报道中，利用相关技术方法和设备初步提取了这种小分子肽，但毕竟是初步初级实验技术提纯手段，整个工艺比较粗糙，导致产品在纯度、颜色、抑菌效果、产率等方面还达不到要求，无法实现广谱抑菌效果。技术缺点：①酸菜发酵液45℃下的浓缩液过于浓稠，盐析沉淀效果较差；②盐析(NH4)2SO4浓度梯度变化不明显，仅采用了30％和60％两个浓度；③离心转数不够，仅是15000r/min，不能使有效成分完全沉淀；④冻干粉采用稀盐酸稀释，稀释剂本身就有抑菌效果，因此不能得出产品本身有效的抑菌直径；⑤没有进行抑菌效价鉴定，不能准确确定提纯物质的有效抑菌效力；⑥冷冻干燥技术的使用，导致产品的部分活性变性丧失；⑦凝胶层析洗脱液体积不够，不能保证有效物质完全被洗脱。

食品工业飞速发展，小分子肽将会在二十一世纪具有广阔的应用前景，也必将创造出极大地社会效益与经济效益。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有的酸菜水分离提取小肽类天然防腐剂的方法存在工艺不完善，产品的纯度、颜色、抑菌效果和产率不达标的问题，而提供了一种利用酸菜发酵液分离提取小肽类天然食品防腐剂的方法。

利用酸菜发酵液分离提取小肽类天然食品防腐剂的方法按以下步骤进行：一、取500ml酸菜水在常温下5000～6000r/min离心处理30min，取上清液，采用抽真空水浴式旋转蒸发仪40℃减压浓缩5倍，得浓缩液；

二、向100ml浓缩液中加入质量浓度为30％的硫酸铵并不断搅拌，盐析沉淀完全后于4℃下静止4h，然后4℃下30000r/min离心处理15min，分别标记离心管，然后取每管上清液和沉淀，分别采用琼脂扩散法进行抑菌试验，同时用质量浓度为30％的硫酸铵溶液做空白试验，测定上清液和沉淀的抑菌圈直径，将抑菌效果不明显的离心管中的上清液于4℃下加入质量浓度为40％的硫酸铵并不断搅拌，于4℃下静止过夜，然后4℃下30000r/min离心处理15min，分别标记离心管，然后取每管上清液和沉淀，分别采用琼脂扩散法进行抑菌试验，同时用质量浓度为40％的硫酸铵溶液做空白试验，测定上清液和沉淀的抑菌圈直径，将抑菌效果不明显的离心管中的上清液于4℃下加入质量浓度为50％的硫酸铵并不断搅拌，于4℃下静止过夜，然后4℃下30000r/min离心处理15min，分别标记离心管，然后取每管上清液和沉淀，分别采用琼脂扩散法进行抑菌试验，同时用质量浓度为50％的硫酸铵溶液做空白试验，测定上清液和沉淀的抑菌圈直径，将抑菌效果不明显的离心管中的上清液于4℃下加入质量浓度为60％的硫酸铵并不断搅拌，于4℃下静止过夜，然后4℃下30000r/min离心处理15min，分别标记离心管，然后取每管上清液和沉淀，分别采用琼脂扩散法进行抑菌试验，同时用质量浓度为60％的硫酸铵溶液做空白试验，测定上清液和沉淀的抑菌圈直径；

三、收集步骤二中四次盐析抑菌效果最佳的离心管中的沉淀，加入到截留相对分子质量1200～1700的透析袋内，以Tris-H₃PO₄为透析内液，蒸馏水作透析外液，4℃下透析，同时用氯化钡检测透析袋内没有BaSO₄产生，即完成透析，获得透析后样品；

四、CM Sephadex C-25层析凝胶经预处理后装入层析柱，将透析后样品用Tris-H₃PO₄稀释上样后，洗脱液使用顺序是先用40ml的HAC-NaAC缓冲液，再用60ml浓度为0.02mol/L的KCl溶液，收集洗脱液；