[发明专利]一种耐高温壳聚糖酶酵母工程菌及其耐高温壳聚糖酶的生产方法

摘要

本发明提供了一种编码重组的耐高温壳聚糖酶的毕赤酵母基因工程菌株Gs115/HBCSN及其生产耐高温壳聚糖酶的方法。本发明根据毕赤酵母密码子偏爱性，对原始的Aspergillus fumigatus的壳聚糖酶基因(GenBankTM accession number AY190324)进行了优化，优化后的核酸序列与原始核酸序列的同源性为77％。本发明中重组的毕赤酵母生产的壳聚糖酶以可溶的形式分泌到胞外，表达量高达3mg/mL，酶活可达25000U/mL。该壳聚糖酶在毕赤酵母中糖基化修饰后具有极好的耐热性，具体表现为在80℃处理120min，90℃处理40min，100℃处理20min后各自的残余活性分别为56％，87％，87％。本发明提供的耐高温壳聚糖酶特别适合大规模工业化降解壳聚糖，减少环境污染。

主权项

一种耐高温壳聚糖酶的基因，其特征在于该基因的核苷酸序列如下：tacaacctac ccaacaattt gaagcaaatt tacgataagc ataagggtaa atgttctaag  60gtccttgcta agggattcac taacggtgat gcttctcaag gtaagtcttt ttcttactgt 120ggagatattc ctggtgctat tttcatttct tcttcaaaag gttacacaaa catggatatt 180gattgtgatg gagctaacaa ctcagctggt aagtgcgcta acgatccatc tggtcaaggt 240gaaactgctt ttaagtctga tgttaagaag tttggtattt ctgacttgga tgctaatatt 300catccatacg ttgtttttgg taacgaagat cattctccaa agtttaagcc acaatctcat 360ggtatgcaac cattgtctgt tatggctgta gtttgtaacg gtcaattaca ttacggaatt 420tggggtgata ctaatggtgg tgtttctact ggtgaggcat caatttcctt ggctgatttg 480tgttttccaa acgaacactt agatggtaac catggacatg atcctaacga cgttttgttt 540attggtttca cttcaaagga tgctgttcca ggtgctactg ccaagtggaa ggctaagaac 600gctaaggaat tcgaagattc tataaagtct attggtgaca agttggttgc tggtttgaag 660gcttaa                                                            666。