[发明专利]食源性致病菌多重扩增内标序列及其制备方法

摘要

一种检疫技术领域的食源性致病菌PCR检测中的多重扩增内标序列及其制备方法；所述食源性致病菌PCR检测中的多重扩增内标序列的碱基序列如下：1054F-15bp-hlyAF-15bp-PrsF-15bp-PSF-15bp-SA1F-扩增内标序列-SA1R-15bp-hlyAR-15bp-PSR-15bp-PrsR-15bp-1054R；所述多重扩增内标序列的制备方法包括如下步骤：随机重排SEQ ID NO：1所示的碱基序列，得到相应的核酸，选取与所要检测的五种目的基因无同源性的核酸作为扩增内标序列；随机重排碱基序列ATTTCCAAGGTGAGC，选择任一序列作为长度为15bp的序列；采用常规多重扩增内标构建方法，利用步骤一所得的扩增内标序列、长度为15bp的序列以及碱基序列如SEQ ID NO：8～17所示的10条序列构建得到多重扩增内标。使用本发明的多重扩增内标可使PCR检测结果能指示假阴性的发生，提高PCR检测的准确率。

主权项

一种食源性致病菌PCR检测中的多重扩增内标序列，其特征在于，该序列的碱基序列如下：1054F--15bp--hlyAF--15bp--PrsF--15bp--PSF--15bp--SA1F--扩增内标序列--SA1R--15bp--hlyAR--15bp--PSR---15bp--PrsR--15bp--1054R；其中，所述1054F的碱基序列如SEQ ID NO：8所示；所述1054R的碱基序列如SEQ ID NO：9所示；所述hlyAF的碱基序列如SEQ ID NO：10所示；所述hlyAR的碱基序列如SEQ ID NO：11所示；所述PrsF的碱基序列如SEQ ID NO：12所示；所述PrsR的碱基序列如SEQ ID NO：13所示；所述PSF的碱基序列如SEQ ID NO：14所示；所述PSR的碱基序列如SEQ ID NO：15所示；所述SA1F的碱基序列如SEQ ID NO：16所示；所述SA1R的碱基序列如SEQ ID NO：17所示；所述15bp为由如SEQ ID NO：18所示的的碱基序列随机重排后得到的任一序列；所述扩增内标序列具体为：随机重排SEQ ID NO：1所示的碱基序列，得到相应的核酸，选取与所要检测的五种目的基因无同源性的任一核酸作为扩增内标序列；所述五种目的基因具体为碱基序列分别如SEQ ID NO：3～7所示的基因。