[发明专利]一种Y染色体微缺失的基因检测方法

摘要

本发明公开了一种Y染色体微缺失的基因检测方法。该方法提取人外周血基因组DNA后，采用多重PCR引物设计，多重PCR反应体系包含N对特异扩增Y染色体AZF片断中STSs位点的嵌合引物对和1对通用引物对。多重PCR反应在N+1对引物的参与下，在同一个反应体系中经过变性、退火、延伸循环扩增目的DNA模板的反应；取10ulPCR产物，EB染色，经3％琼脂糖电泳。电泳电压4V/cm，电泳时间20分钟；然后紫外透射仪下观察电泳图谱对结果作出判断。从而建立了一种简化PCR反应条件，扩增效率高，易于临床实验操作的检测方法。

主权项

1.一种Y染色体微缺失的基因检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)提取人外周血基因组DNA常规煮沸裂解法或柱洗脱法提取抗凝全血250ul中的DNA，可得预期DNA产量约4-12ug，作为模板DNA；(2)PCR扩增采用多重PCR引物设计，多重PCR反应体系包含N对特异扩增Y染色体AZF片断中STSs位点的嵌合引物对和1对通用引物对；多重PCR反应在N+1对引物的参与下，在同一个反应体系中经过变性、退火、延伸循环扩增目的DNA模板的反应；(3)检测扩增产物取10ulPCR产物，EB染色，经3％琼脂糖电泳。电泳电压4V/cm，电泳时间20分钟；(4)结果判断a.紫外透射仪下观察电泳图谱，SRY基因作为男性性别决定基因，在实验中作为内参对照；男性标本都应扩增出内参对照条带，使用一女性样本用于监控实验的特异性和污染情况；水空白对照用来监控试剂是否被污染；b.如与正常生育男性对照相比出现一个或多个位点条带缺失，判断为其对应的AZF片断缺失；如A管的MsY254和B管的MsY255条带丢失，判断为AZFc缺失；如A管的MsY254、MsY127和B管的MsY255、MsY134条带丢失，判断为AZFb+c缺失。