[发明专利]一种Y染色体微缺失的基因检测方法

权利要求书

1.一种基因检测Y染色体微缺失的多重PCR反应体系，其特征在于：

多重PCR反应体系为15ul，反应体系的pH值为8.5，包括以下试剂： PCR反应液，Taq酶，dATP，dGTP，dCTP，dTTP，MgCl₂，引物，模板DNA；dNTP 反应终浓度均为200uM；MgCl₂反应终浓度为1.5mM；PCR扩增分成两管进行： A管复合扩增5对引物；B管复合扩增5对引物，两管均设计MSRY引物作为 内对照；引物对分组如下：

A组：MSRY，MsY254，MsY127，MsY86，YUP

B组：MSRY，MsY134，MsY84，MsY255，YUP

其中所述的多重PCR反应体系中非人类同源序列通用引物YUP的引物 碱基序列为：

YUP1：5’-CGC CAG GGT TTT CCC AGT CAC GAC-3’

YUP2：5’-TCA CAC AGG AAA CAG CTA TGA C-3’

在每个特异性扩增基因STS位点的正、反引物5’端分别加上YUP1或 YUP2寡核苷酸序列，合成嵌合引物的碱基序列，分别对应：

MsY84嵌合引物对：

MsY84-F：5’-YUP1-AGA AGG GTC TGA AAG CAG GT-3’

MsY84-R：5’-YUP2-GCC TAC TAC CTG GAG GCT TC-3’

MsY86嵌合引物对：

MsY86-F：5’-YUP1-AGA CTA TGC TTC AGC AGG TC-3’

MsY86-R：5’-YUP2-GAA CCG TAT CTA CCA AAG CAG C-3’

MsY127嵌合引物对：

MsY127-F：5’-YUP1-GGC TCA CAA ACG AAA AGA AA-3’

MsY127-R：5’-YUP2-CTG CAG GCA GTA ATA AGG GA-3’

MsY134嵌合引物对：

MsY134-F：5’-YUP1-GTC TGC CTC ACC ATA AAA CG-3’

MsY134-R：5’-YUP2-ACC ACT GCC AAA ACT TTC AA-3’

MsY254嵌合引物对：

MsY254-F：5’-YUP1-GGG TGT TAC CAG AAG GCA AA-3’

MsY254-R：5’-YUP2-GAA CCG TAT CTA CCA AAG CAG C  -3’

MsY255嵌合引物对：

MsY255-F：5’-YUP1-GTT ACA GGA TTC GGC GTG AT-3’

MsY255-R：5’-YUP2-CTC GTC ATG TGC AGC CAC-3’

MSRY嵌合引物对：

MSRY-F：5’-YUP1-GAA TAT TCC CGC TCT CCG GA-3’

MSRY-R：5’-YUP2-GCT GGT GCT CCA TTC TTG AG-3’。