[发明专利]一种改构的人淀粉样多肽突变体－普兰林肽(pramlintide)的制备方法在审
| 申请号： | 200810218533.1 | 申请日： | 2008-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN101413009A | 公开（公告）日： | 2009-04-22 |
| 发明（设计）人： | 黄亚东;吴道贫;胡宏伟;苏志坚;刘洁生;曲红艳;李江峰;柯实 | 申请（专利权）人： | 广东暨大基因药物工程研究中心有限公司;广州暨南大学医药生物技术研究开发中心 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/70;C07K19/00;C07K14/575 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510630广东省广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种改构的人淀粉样多肽突变体-普兰林肽(pramlintide)的制备方法。本制备方法利用氨基端带有6个组氨酸标记小分子泛素相关修饰因子成熟肽(Small Ubiquitin-related Modifier，SUMO)和普兰林肽基因的进行融合表达。另外，本发明中普兰林肽基因是根据大肠杆菌偏爱性密码子为依据的合成基因，重组菌在发酵表达过程后，通过过Ni2+柱进行纯化，纯化的蛋白通过蛋白酶剪切后再次Ni2+柱过收集流穿液的峰得到纯化的普兰林肽。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 淀粉 多肽 突变体 普兰 pramlintide 制备 方法 | ||
【主权项】：
1. 一种改构的人淀粉样多肽突变体—普兰林肽(pramlintide)的制备方法，该方法包括以下步骤：(1)提供编码小分子泛素相关修饰因子成熟肽、普兰林肽融合蛋白的核苷酸序列，该融合基因的5’末端带有6个组氨酸的编码序列，(2)将步骤(2)中核苷酸序列连接到合适原核表达载体pET-3c(Novagen co.Ltd.USA)中，(3)用步骤(3)的重组表达载体转化适当的大肠杆菌宿主细胞，(4)在适于以可溶形式表达融合蛋白的条件下培养步骤(4)中被转化的大肠杆菌宿主细胞，(5)大肠杆菌宿主细胞内分别表达出小分子泛素相关修饰因子成熟肽和普兰林肽的融合蛋白(SEQ ID No：4)，(6)收集发酵细胞并破碎细胞，按步骤5得到纯化的普兰林肽。
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