[发明专利]大肠杆菌O157恒温核酸扩增快速检测试剂盒及其用法

摘要

本发明公开了一种大肠杆菌O157恒温核酸扩增快速检测试剂盒及其用法，试剂盒包括引物混合液，其序列为外引物1：GCTATACCACGTTACAGCGTG；外引物2：ACTACTCAACCTTCCCCAGTTC；内引物1：GCTCTTGCCACAGACTGCACATTCGTTGACTACTTCTTATCTGG；内引物2：CTGTGACAGCTGAAGCTTTACGCGAAATCCCCTCTGAATTTGCC；磷酸缓冲液PBS、多聚甲醛、多聚赖氨酸、溶菌酶、蛋白酶K、RNA酶、BstDNA聚合酶、反应液、样品预处理液、显色剂、阳性对照及阴性对照。利用该试剂盒通过大肠杆菌O157菌体固定处理、细胞通透性处理、恒温基因扩增反应、判断反应产物结果实现对大肠杆菌O157高特异性、快速、高效、高灵敏度、简便的原位检测。

主权项

1、一种大肠杆菌O157大肠杆菌恒温核酸扩增快速检测试剂盒，其特征在于，试剂包括：①引物混合液：混合液中四条引物浓度均为10pmol/μl，引物序列如下：外引物1：GCTATACCACGTTACAGCGTG；外引物2：ACTACTCAACCTTCCCCAGTTC；内引物1：GCTCTTGCCACAGACTGCACATTCGTTGACTACTTCTTATCTGG；内引物2：CTGTGACAGCTGAAGCTTTACGCGAAATCCCCTCTGAATTTGCC；②磷酸缓冲液；③多聚甲醛：为2-4％质量；④多聚赖氨酸：为0.03-0.05％质量；⑤溶菌酶溶液：浓度为0.6-0.8mg/ml；⑥蛋白酶K：浓度为0.1-0.3mg/ml；⑦RNA酶：浓度为1-2mg/ml；⑧Bst DNA聚合酶：浓度为8U/μl；⑨反应缓冲液：10mMdNTP∶10×ThermoPol反应缓冲液∶150mMMgSO₄＝8∶5∶2体积；⑩样品预处理液：pH7.0-8.0、20mMTris-HCl，2mMEDTA，1.2％TritonX-100；显色剂：荧光染料1-2mg/mlDAPI；系列浓度乙醇溶液：为30-70％体积乙醇、70-90％体积乙醇、90-100％体积乙醇；阳性对照为O157大肠杆菌基因组DNA，阴性对照为不含模板的反应混合液。