[发明专利]融合骨唾液酸蛋白的酵母表达载体、纯化方法及其应用

摘要

本发明公开了一种融合骨唾液酸蛋白的酵母表达载体、纯化方法及其应用，属于基因工程和微生物发酵工程技术领域。本发明首先根据GenBank中人骨唾液酸蛋白(hbsp)基因序列设计基因特异性引物，应用RT－PCR技术从人股骨外膜组织的总RNA中扩增出BSP的cDNA，克隆至pBluescript II RI质粒中，构建重组质粒pB－hbsp。根据毕赤酵母分泌型表达质粒pPICZaA及hbsp基因序列设计PCR引物，以重组质粒pB－hbsp为模板进行PCR扩增，PCR产物与质粒pPICZaA重组，构建分泌型融合表达rhBSP－His6的质粒pPICZaA－hbsp。融合表达的rhBSP－His6应用固定化金属离子亲和层析(IMAC)法进行纯化，目的蛋白rhBSP达到电泳纯。本发明为BSP的获得提供了一条新途径，为深入研究BSP免疫学和生物学性质和探索其作为药物治疗靶点的可行性奠定了基础。

主权项

1、一种融合骨唾液酸蛋白的酵母表达载体pPICZaA-hbsp，其特征在于是通过以下步骤获得的：1)根据GenBank中人骨唾液酸蛋白基因hbsp序列设计基因特异性引物：上游引物：5’-AGGAATTCGACTGCCAGAGGAAGCAATCAC-3’下游引物：5’-CGGAATTCACTGGTGGTGGTAGTAATTCTG-3’以骨唾液酸蛋白BSP基因为模板，应用RT-PCR技术从人股骨外膜组织的总RNA中扩增出BSP的cDNA，克隆至pBluescript II RI质粒中，构建重组质粒pB-hbsp；2)根据毕赤酵母分泌型表达质粒pPICZaA及hbsp序列设计PCR设计引物：上游引物：5’-CCGCTCGAGAAAAGATTCTCAATGAAAAA-3’下游引物：5’-GCTCTAGATAATCATCATCATCTTTCTGGTGGTGGTAGTAA-3’以重组质粒pB-hbsp为模板进行PCR扩增，PCR产物与毕赤酵母表达载体pPICZaA重组，构建分泌型融合表达rhBSP-His6的质粒pPICZaA-hbsp。