[发明专利]融合骨唾液酸蛋白的酵母表达载体、纯化方法及其应用

权利要求书

1、一种融合骨唾液酸蛋白的酵母表达载体pPICZaA-hbsp，其特征在于是通过以下步骤获得的：

1)根据GenBank中人骨唾液酸蛋白基因hbsp序列设计基因特异性引物：

上游引物：5’-AGGAATTCGACTGCCAGAGGAAGCAATCAC-3’

下游引物：5’-CGGAATTCACTGGTGGTGGTAGTAATTCTG-3’

以骨唾液酸蛋白BSP基因为模板，应用RT-PCR技术从人股骨外膜组织的总RNA中扩增出BSP的cDNA，克隆至pBluescript II RI质粒中，构建重组质粒pB-hbsp；

2)根据毕赤酵母分泌型表达质粒pPICZaA及hbsp序列设计PCR设计引物：

上游引物：5’-CCGCTCGAGAAAAGATTCTCAATGAAAAA-3’

下游引物：5’-GCTCTAGATAATCATCATCATCTTTCTGGTGGTGGTAGTAA-3’

以重组质粒pB-hbsp为模板进行PCR扩增，PCR产物与毕赤酵母表达载体pPICZaA重组，构建分泌型融合表达rhBSP-His6的质粒pPICZaA-hbsp。

2、权利要求1所述的融合骨唾液酸蛋白的纯化方法，其特征在于将融合表达载体pPICZaA-hbsp线性化后电转化酵母菌GS115，通过甲醇诱导表达，获得融合蛋白rhBSP-His6，应用固定化金属离子亲和层析法进行纯化，目的蛋白达到电泳纯。

3、权利要求1所述的融合骨唾液酸蛋白在制备单克隆及多克隆抗体中的应用。