[发明专利]高活性凝血酶抑制剂的制备方法无效
| 申请号： | 200610041723.1 | 申请日： | 2006-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN1840187A | 公开（公告）日： | 2006-10-04 |
| 发明（设计）人： | 龙铟;刘家云;刘莉;王宗仁 | 申请（专利权）人： | 龙铟;刘家云 |
| 主分类号： | A61K38/58 | 分类号： | A61K38/58;C12N15/63;A61P7/02 |
| 代理公司： | 西安文盛专利代理有限公司 | 代理人： | 彭冬英 |
| 地址： | 710032陕西省西*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高活性凝血酶抑制剂的制备方法，以凝血酶的天然特异抑制剂水蛭素为改造对象，应用DNA家族改组技术，将水蛭素HV1、HV2、HV3基因进行改组，构建水蛭素噬菌体展示的改组文库，以凝血酶为包被抗原，对噬菌体改组库进行3轮“吸附、洗脱、扩增”的富集淘选，再经ELISA筛选得到多个与凝血酶具有高亲和力的噬菌体单克隆。对这些克隆进行原核诱导表达，检测纯化表达产物的抗凝血酶活性，获得抗凝血酶活性较天然的水蛭素更强的水蛭素蛋白。采用本发明所制备的高活性凝血酶抑制剂具有以下优点：1)抗凝血酶活性更强，疗效显著；2)分子量小，不具有免疫原性；3)安全，无明显毒副作用。 | ||
| 搜索关键词： | 活性 凝血酶 抑制剂 制备 方法 | ||
【主权项】：
1、一种高活性凝血酶抑制剂的制备方法，其特征在于：按下述步骤进行：1)根据凝血酶抑制剂的基因序列，选择水蛭素HV1、HV2、HV3作为改造对象，采用分段合成寡核苷酸片段，互补寡核苷酸片段退火配对后，经PCR扩增而获得目的基因。2)取等量的上述3种纯化后的PCR产物，用DNaseI消化，回收50bp左右片段，经无引物PCR进行随机组装，有引物PCR扩增，回收目的片段，获得水蛭素的DNA家族改组基因。3)将DNA家族改组基因定向克隆入经SfiI和NotI双酶切的噬菌体表达载体pCANTAB5E中，转化E.coli TG1细胞，加入M13K07辅助噬菌体进行超感染，获得水蛭素的噬菌体改组文库。4)以凝血酶为包被抗原，对噬菌体改组库进行3轮“吸附、洗脱、扩增”的筛选，随着包被抗原浓度的不断降低，洗涤次数及洗涤力度的不断加强，改组文库中凝血酶特异的水蛭素突变体得到了有效富集。5)扩增第3轮筛选所得的噬菌体克隆，用ELISA鉴定各噬菌体单克隆与凝血酶的结合活性，获得能与凝血酶产生高亲和力结合的阳性克隆。6)将ELISA筛选出的阳性噬菌体感染HB2151，加入IPTG诱导表达，提取菌体的周质提取液，经HiTrap Anti-E Tag亲和纯化柱进行纯化，ChromozymTH为发色底物，测定其水蛭素变异体抑制凝血酶的活性，得到高活性的凝血酶抑制剂。
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- 2019-12-03 - 2020-03-27 - A61K38/58
- 本发明公开了一种用于皮肤干燥瘙痒的组合物及其护肤软膏，涉及皮肤用药及其制备技术领域。用于皮肤干燥瘙痒的组合物包含以下重量组份原料：水蛭素0.2‑0.5份，芦荟提取物0.6‑1.5份，制何首乌0.1‑0.3份，金银花0.1‑0.3份，甘油0.8‑1份，维E 0.6‑1份，冰片0.1‑0.3份。本发明还可以是用于皮肤干燥瘙痒的护肤软膏，由如下步骤制备而成：将制何首乌与金银花按重量比1:1混合后，加入6‑10倍水煎煮2h后，过滤取滤液Ⅰ；将水蛭素与芦荟提取物按重量比1:3搅拌均匀，在80‑90℃下灭菌灭酶10min，得到混合物Ⅰ；将滤液Ⅰ、混合物Ⅰ混合后，加入甘油，在80‑90℃下用真空均质机进行均质，得混合物Ⅱ；将混合物Ⅱ冷却至室温后，边搅拌边加入维E和冰片，制得胶状软膏。
- 凝血酶抑制剂在制备抗肿瘤侵袭转移药物中的用途-201810408784.X
- 莫炜;赵冰;于敏;张艳玲 - 复旦大学
- 2018-04-28 - 2019-11-05 - A61K38/58
- 本发明属生物技术领域，涉及凝血酶抑制剂新的药用用途，具体涉及凝血酶抑制剂尤其是二价直接凝血酶抑制剂在制备抗肿瘤侵袭转移药物中的用途。本发明采用具有抗凝活性的直接凝血酶抑制剂短肽DTIP进行了体外细胞试验和体内动物实验，试验结果显示，所述的二价直接凝血酶抑制剂DTIP，在体外能抑制肿瘤的侵袭和转移；体内实验显示二价直接凝血酶抑制剂DTIP对肿瘤发生发展具有影响进；进一步，所述的直接凝血酶抑制剂短肽DTIP可制备抗肿瘤侵袭转移药物。
- 一种治疗骨关节疼痛的外用膏药及其制备方法-201910600423.X
- 王浙斌;张美丽 - 嵊州市王氏医疗器械有限公司
- 2019-07-04 - 2019-11-01 - A61K38/58
- 本发明涉及一种治疗骨关节疼痛的外用膏药及其制备方法，原料包括如下组分：山金车5‑10份、丝瓜子8‑15份、豨签草5‑10份、天麻15‑25份、仙人掌6‑12份、羊骨头8‑15份、蓖麻子15‑20份、蚓激酶4‑8份、独活10‑20份、透骨草5‑10份、桑寄生8‑15份、艾草15‑20份、夜交藤8‑15份、延胡索20‑30份、兴安杜鹃25‑30份、骆驼蓬10‑15份、水蛭素4‑8份、迷迭香4‑8份、狗脊10‑15份、片姜黄10‑15份、花椒8‑15份、刺老芽15‑25份、穿山甲8‑15份、伸筋草15‑20份、吴茱萸15‑20份、夏枯草8‑15份、地龙10‑15份、冰片8‑12份、制乳香12‑15份、制没药12‑15份。该治疗骨关节疼痛的外用膏药治疗效果好，通过本申请的贴敷装置进行贴敷，药物能够直达病灶，具有很好的疗效，治愈率高，副作用小。
- 一种改善心脑血管健康状况的功能性营养食品-201910733483.9
- 童长虹 - 上海医盛生物科技发展有限公司
- 2019-08-09 - 2019-10-25 - A61K38/58
- 本发明提供一种调节心脑血管健康和减少心脑血管疾病风险的功能性营养食品。采用以下技术方案：包含以下重量份的有效活性成分原料：纳豆冻干粉20份，红景天提取物15份，水蛭素5份，地龙3份。叶酸2份，丹参3份，刺五加5份，银杏5份，神经肽2份，红曲5份，藏红花8份。占药材总重量的10％～20％重量份的辅料，所述的辅料可以是谷类淀粉、或薯类淀粉，或糊精。各原料采用常规制法制成片剂、胶囊剂、口服液或饮料。本发明功能性营养食品配方设计合理巧妙，各组分间相互协同，最大极致的发挥对心脑血管疾病的预防和治疗作用，且该产品安全、有效率高、无毒副作用，是一种预防和治疗心脑血管疾病的最佳的功能性营养食品。
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