[发明专利]非抗生素抗性穿梭质粒表达载体及其构建方法和应用无效
| 申请号： | 03100415.6 | 申请日： | 2003-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN1482247A | 公开（公告）日： | 2004-03-17 |
| 发明（设计）人： | 王春凤;秦泽荣;孙哲;刘尚高 | 申请（专利权）人： | 王春凤;孙哲 |
| 主分类号： | C12N15/64 | 分类号： | C12N15/64;C12N15/65;C12N15/74;C12N15/70;C12N1/21;A23C9/123;A61K35/74;A23K1/16 |
| 代理公司： | 长春科宇专利代理有限责任公司 | 代理人： | 李恩庆 |
| 地址： | 130118吉林省长春市*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明属于生物工程技术领域，是一种非抗生素抗性穿梭质粒表达载体及构建方法和应用。本发明是把基本质粒载体pMG36e，经限制性内切酶EcoRI在其酶切位点上酶切，成为线型。在近红霉素Er端连接非抗生素抗性基因，之后环化回环状。再在这个环上把红霉素基因Er用内切酶去除，形成非抗生素抗性穿梭表达质粒载体。将人或动物疾病的保护性抗原基因连接入本发明的非抗生素抗性质粒载体，可以制造功能性食品，对特定疾病具有预防、保护作用的细菌悬液、口服补剂、管饲产品以及动物性疫苗。本发明用非抗生素可行基因替代红霉素基因，在使用过程中不存在抗生素抗性基因扩散的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 抗生素 抗性 穿梭 质粒 表达 载体 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种非抗生素抗性穿梭质粒表达载体，其特征是先在基本质粒载体pMG36e的酶切位点上进行酶切，再在近红霉素Er端连接非抗生素抗性基因，最后除去红霉素抗性基因Er，用pMG425t表示，表达式为： pMG36e+ThyA/(β-Gal)-Er＝pMG425t式中，pMG36e为基本质粒载体，它含有红霉素抗性基因，可在大肠杆菌和乳酸杆菌中表达，ThyA/(β-Gal)为非抗生素抗性基因，Er表示红霉素抗性基因，+号表示连接，-号表示去除，＝号表示形成，pMG425t表示本发明的非抗生素抗性穿梭表达质粒载体。
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- 本发明公开了一种多方法联用的大片段DNA重组方法，包括以下步骤：S确认好需要进行拼接修饰的BAC，根据需要将BAC修饰好重组酶位点，再通过RMCE进行拼接，拼接完成的BAC进行下一步的拼接；当三个BAC拼接好后再通过phes负筛将不需要的重组酶位点删去，最终得到无缝拼接的BAC；本发明突破了BAC大小限制，原则上最大能到450kb。解决了BAC修饰过程中会引入重组酶位点的问题。提高了整个方案的可操作性，便于进行多个大片段的整合和修饰。
- 一种能够增强mRNA稳定性和可译性的通用核酸药物载体-201680035861.0
- 丁恩雨 - 丁恩雨
- 2016-01-15 - 2021-10-15 - C12N15/64
- 本发明提供了一种通过分子生物学技术所构建的核酸载体pVec。pVec含有CMV增强子/启动子、T7启动子、5’非翻译区(UTR)、多克隆位点、3’UTR、poly A(120A)‑TTATT、BGH poly(A)信号、卡那霉素抗性基因和pUC起点等。因此，pVec可用作DNA疫苗或治疗药物以及mRNA疫苗或mRNA治疗药物的载体。pVec中的5’UTR、3’UTR和poly A(120A)‑TTATT能够被分别添加到体外转录mRNA的5’和3’端，并能稳定所转录的mRNA。此外，本发明还提供了构建的pVec‑GM‑CSF、pVec‑hIL‑12和pVAX1‑hIL‑12，来进一步评价pVec。
- 用于真核宿主中真核mRNA生产、输出和翻译的工程细菌系统和方法-201980056937.1
- R·塞尔;P·科斯塔-努恩斯;G·H·殷 - 美国卵石实验室公司
- 2019-07-05 - 2021-07-23 - C12N15/64
- 本发明技术包括用于生成基因工程化的原核生物体的新系统、方法和组合物，所述基因工程化的原核生物体被配置为生产可引入到真核宿主并在真核宿主中翻译的真核样mRNA。其他方面可包括新型真核样核苷酸构建体和mRNA分子，以及从原核细胞有效递送至靶真核宿主细胞的方法和系统。本发明进一步的方面包括用于真核细胞非整合性转化的系统、方法和组合物。
- DNA片断与载体快速连接转化的新方法及其应用-201611133372.7
- 刘秀梅;朴海龙 - 中国科学院大连化学物理研究所
- 2016-12-10 - 2021-07-20 - C12N15/64
- 本发明涉及一种基因克隆技术，即对传统的分子克隆技术进行了改良，具体地说是运用PCR扩增技术替代常规的连接酶反应步骤，将待克隆的DNA片断与载体快速连接并直接转化到大肠杆菌感受态细胞的实验方法。与传统方法相比，该技术不受限制性内切酶酶切位点限制，根据DNA片段和载体末端序列设计接头引物，利用PCR反应可将任何DNA片段与载体连接起来，实现分子克隆的目的。该方法作为一种通用方法,不仅缩短了分子克隆反应时间，提高了克隆转化效率，而且适用于不同长度基因与载体的连接及转化，具有广泛的应用价值。
- 核酸酶介导的DNA组装-202010960987.7
- 克里斯·舒恩赫;约翰·麦克沃特;科里·莫蒙;林恩·麦克唐纳;安德鲁·J.·墨菲;格雷格·S.·沃肖;约瑟·F.·罗哈斯;卡曼·维纳斯·莱;大卫·M.·巴伦苏埃拉;凯特琳·蒙塔尼亚 - 瑞泽恩制药公司
- 2015-06-23 - 2020-12-04 - C12N15/64
- 本文提供了一种方法，所述方法使用序列特异性核酸酶试剂(例如，gRNA‑Cas复合物)组装至少两个核酸以形成具有互补性的末端序列，随后组装所述重叠互补序列。所述核酸酶试剂(例如，gRNA‑Cas复合物)可以在dsDNA中形成双链断裂而形成重叠末端序列，或者可以在每条链上形成切口而产生互补悬垂末端序列。采用本文所述方法进行的组装可以组装任何具有重叠序列的核酸，或者可以使用接合寡核苷酸来组装不具有互补末端的序列。
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