[发明专利]猪单精子微卫星DNA标记分型方法无效
| 申请号： | 00115945.3 | 申请日： | 2000-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN1337469A | 公开（公告）日： | 2002-02-27 |
| 发明（设计）人： | 李奎;赵书红;彭中镇;余梅;刘榜;熊统安 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京农林水专利代理有限公司 | 代理人： | 张红兵 |
| 地址： | 430070 *** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于猪微卫星DNA标记分型技术领域,具体涉及猪的单精子微卫星DNA标记分型的方法。其特点是,以琼脂糖电泳法分离猪的单个精子,采用多重PCR和银染法进行实验,设计了内嵌引物以提高扩增的准确性,建立一套适合于猪单精子多个微卫星位点单倍型检测的方法,本发明可用于猪高精度遗传作图和性别鉴定。与已有技术相比,本发明简便、快速而且安全性好。 | ||
| 搜索关键词： | 精子 卫星 dna 标记 方法 | ||
【主权项】：
1、一种猪微卫星DNA标记分型方法，含有猪微卫星位点引物，其步骤包括PCR和等位基因检测，其特征在于，对每个位点设计一个半嵌套引物，所述的步骤包括收集猪精液，分离单精子，选择检测位点，引物及内嵌引物的设计，单精子裂解，PCR扩增，所述的PCR为三轮，按照以下步骤操作：1)采用琼脂糖电泳法分离猪的单个精子，在小离心管中直接裂解：2)第一轮PCR使步骤1)所述的单精子DNA拷贝数大量增加，使其适合于对多个位点的检测和分型；3)第二轮PCR对所涉及的特定目的位点进行扩增，获得大量目的微卫星DNA片段；4)第三轮PCR采用所述的内嵌引物，对目的位点的基因型进行分型；5)采用聚丙酰胺凝胶电泳和银染方法对步骤4)所述的基因型进行分析和鉴别。
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